| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-20页 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第9页 |
| 1.2 原核细胞锰转运蛋白的发展概况 | 第9-12页 |
| 1.2.1 原核细胞锰转运蛋白研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2.2 原核细胞 MntH 转运蛋白调控进展 | 第11-12页 |
| 1.3 真核细胞 NRAMP 家族转运蛋白发展概况 | 第12-17页 |
| 1.3.1 真核细胞中的铁平衡 | 第12-13页 |
| 1.3.2 铁转运蛋白的发展概况 | 第13页 |
| 1.3.3 NRAMP 家族转运蛋白的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3.4 转铁蛋白 1 的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.5 参与铁平衡的其他家族转运蛋白研究进展 | 第17页 |
| 1.4 铁、锰和感染与免疫 | 第17-18页 |
| 1.5 本文的主要研究内容 | 第18-20页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第20-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 分子生物学相关的生化试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 蛋白表达纯化所需试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 原核表达载体的构建 | 第22-24页 |
| 2.2.2 MntH 膜蛋白表达 | 第24页 |
| 2.2.3 MntH 膜蛋白的分离纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.4 蛋白表达的 Western Blot 检测 | 第25-26页 |
| 2.3 本章小结 | 第26-27页 |
| 第3章 MNTH 的初步表达纯化 | 第27-44页 |
| 3.1 引言 | 第27页 |
| 3.2 MntH 膜蛋白表达检测 | 第27-31页 |
| 3.2.1 构建表达载体 | 第27-28页 |
| 3.2.2 MntH 膜蛋白表达 SDS-PAGE 检测 | 第28-29页 |
| 3.2.3 MntH 膜蛋白的 Western Blot 鉴定 | 第29页 |
| 3.2.4 MntH 膜蛋白的纯化条件优化 | 第29-31页 |
| 3.3 不同去垢剂条件下 MntH 膜蛋白的纯化 | 第31-43页 |
| 3.3.1 阴离子交换柱（resource Q）分离 MntH 蛋白 | 第31-34页 |
| 3.3.2 阳离子交换柱（resource S）分离 MntH 蛋白 | 第34-35页 |
| 3.3.3 DDM 非离子型去垢剂包裹 MntH 膜蛋白 | 第35-36页 |
| 3.3.4 DDM 非离子型去垢剂包裹 MntH 截短体蛋白 | 第36页 |
| 3.3.5 两性去垢剂 CHAPS 包裹 MntH 膜蛋白 | 第36-38页 |
| 3.3.6 两性去垢剂 LDAO 包裹 MntH 蛋白 | 第38-40页 |
| 3.3.7 两性去垢剂 DDAO 包裹 MntH 膜蛋白 | 第40-41页 |
| 3.3.8 非离子型去垢剂 OG 包裹 MntH 膜蛋白 | 第41-42页 |
| 3.3.9 非离子型去垢剂 CYMAL5 包裹 MntH 蛋白 | 第42-43页 |
| 3.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第4章 MBP/SUMO-MNTH 融合蛋白的表达与纯化 | 第44-60页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 载体克隆的构建 | 第44-45页 |
| 4.2.1 带有 SUMO 融合蛋白克隆的构建 | 第44-45页 |
| 4.2.2 带有 MBP 融合蛋白克隆的构建 | 第45页 |
| 4.3 MBP/SUMO-MntH 融合蛋白的表达检测 | 第45-50页 |
| 4.3.1 MBP-MntH 融合蛋白表达的检测 | 第45-46页 |
| 4.3.2 Western Blot 鉴定 MBP-MntH 融合蛋白 | 第46-47页 |
| 4.3.3 SUMO-MntH 融合蛋白表达的检测 | 第47-48页 |
| 4.3.4 不同去垢剂提取 MntH 蛋白效率的检测 | 第48-50页 |
| 4.4 MBP 标签的融合膜蛋白的纯化 | 第50-58页 |
| 4.4.1 高浓度咪唑洗脱分离纯化蛋白 | 第51-52页 |
| 4.4.2 两性去垢剂 CHAPS 对 MntH 蛋白的影响 | 第52-53页 |
| 4.4.3 非离子型去垢剂 CYMAL5 对 MntH 蛋白的影响 | 第53-54页 |
| 4.4.4 非离子型去垢剂 Triton X-100 对 MntH 蛋白的影响 | 第54-55页 |
| 4.4.5 非离子型去垢剂 DM 对 MntH 蛋白的影响 | 第55-56页 |
| 4.4.6 两性去垢剂 LDAO 对 MntH 蛋白的影响 | 第56-57页 |
| 4.4.7 LDAO 以及 DDM 混合去垢剂对 MntH 的影响 | 第57-58页 |
| 4.4.8 MntH 蛋白的圆二色谱表征 | 第58页 |
| 4.5 本章小结 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
