| 符号说明 | 第4-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-27页 |
| 1.1 表观遗传学 | 第16页 |
| 1.1.1 表观遗传学概述 | 第16页 |
| 1.1.2 表观遗传学研究内容 | 第16页 |
| 1.2 DNA 甲基化 | 第16-19页 |
| 1.2.1 DNA 甲基化概述 | 第16-17页 |
| 1.2.2 CpG 岛(CpG islands) | 第17-18页 |
| 1.2.3 影响 DNA 甲基转移酶活性的相关药物 | 第18-19页 |
| 1.2.3.1 核苷类 DNA 甲基转移酶抑制剂 | 第18-19页 |
| 1.2.3.2 抗生素类 | 第19页 |
| 1.2.3.3 植物药类 | 第19页 |
| 1.3 DNA 甲基化检测技术 | 第19-22页 |
| 1.3.1 亚硫酸盐方法检测 DNA 甲基化 | 第19-20页 |
| 1.3.2 甲基化-敏感性单链构象分析 | 第20-21页 |
| 1.3.3 敏感甲基化单个核苷酸引物延伸法 | 第21页 |
| 1.3.4 电化学方法 | 第21-22页 |
| 1.4 电化学生物传感器 | 第22-24页 |
| 1.4.1 电化学 DNA 传感器 | 第22-24页 |
| 1.4.1.1 电化学 DNA 传感器原理 | 第23页 |
| 1.4.1.2 DNA 在固体电极上的固定 | 第23-24页 |
| 1.5 本课题的提出以及主要研究内容 | 第24-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-40页 |
| 2.1 仪器与试剂 | 第27-30页 |
| 2.1.1 仪器 | 第27页 |
| 2.1.2 试剂 | 第27-30页 |
| 2.1.3 实验中主要缓冲溶液的配置 | 第30页 |
| 2.2 试验方法 | 第30-40页 |
| 2.2.1 DNA 甲基化及 DNA 甲基转移酶活性的电化学分析 | 第30-32页 |
| 2.2.1.1 电极预处理 | 第30-31页 |
| 2.2.1.2 电沉积纳米金 | 第31页 |
| 2.2.1.3 探针 DNA 的固定 | 第31页 |
| 2.2.1.4 DNA 杂交 | 第31页 |
| 2.2.1.5 DNA 甲基化处理 | 第31页 |
| 2.2.1.6 亚甲基蓝的固定 | 第31-32页 |
| 2.2.1.7 电化学信号的检测 | 第32页 |
| 2.2.2 甲基化灵敏性内切检测 DNA 甲基化 | 第32-34页 |
| 2.2.2.1 生物条形码的制备 | 第32页 |
| 2.2.2.2 纳米金修饰玻碳电极的制备及表征 | 第32-33页 |
| 2.2.2.3 探针 DNA 的固定 | 第33页 |
| 2.2.2.4 杂交 | 第33页 |
| 2.2.2.5 甲基化修饰 | 第33页 |
| 2.2.2.6 Dpn I 酶切 | 第33页 |
| 2.2.2.7 与生物条形码相互杂交 | 第33页 |
| 2.2.2.8 Streptavidin-HRP 固定 | 第33页 |
| 2.2.2.9 电化学检测 | 第33-34页 |
| 2.2.3 基于滚环复制放大技术检测 DNA 甲基化 | 第34-36页 |
| 2.2.3.1 环状模板的制备 | 第34页 |
| 2.2.3.2 纳米金修饰电极(AuNPs/Au)的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.3.3 探针 DNA 的固定 | 第35页 |
| 2.2.3.4 靶 DNA 杂交 | 第35页 |
| 2.2.3.5 甲基化修饰 | 第35页 |
| 2.2.3.6 MBD1 蛋白, His-tag, biotin-IgG 的固定 | 第35页 |
| 2.2.3.7 滚环扩增过程 | 第35页 |
| 2.2.3.8 S-ALP 的固定 | 第35页 |
| 2.2.3.9 电化学检测 | 第35-36页 |
| 2.2.4 电化学免疫传感器检测 DNA 甲基化及农药对甲基转移酶活性的研究 | 第36-38页 |
| 2.2.4.1 ALP-IgG-AuNPs、HTA-AuNPs 的制备 | 第36页 |
| 2.2.4.2 电极预处理 | 第36页 |
| 2.2.4.3 纳米金修饰电极(AuNPs/Au)的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.4.4 探针 DNA 的固定 | 第37页 |
| 2.2.4.5 靶 DNA 杂交 | 第37页 |
| 2.2.4.6 甲基化修饰 | 第37页 |
| 2.2.4.7 MBD1 蛋白的固定 | 第37页 |
| 2.2.4.5 HTA-AuNPs 的固定 | 第37页 |
| 2.2.4.9 Au -ALP-IgG 的固定 | 第37页 |
| 2.2.4.10 电化学信号的检测 | 第37-38页 |
| 2.2.5 基于发夹 DNA 循环杂交扩增技术检测 DNA 甲基化 | 第38-40页 |
| 2.2.5.1 金电极预处理 | 第38页 |
| 2.2.5.2 将纳米金修饰在电极表面 | 第38页 |
| 2.2.5.3 探针 DNA 的固定 | 第38-39页 |
| 2.2.5.4 与互补 DNA 杂交 | 第39页 |
| 2.2.5.5 甲基化修饰 | 第39页 |
| 2.2.5.6 与发卡 DNA 循环杂交 | 第39页 |
| 2.2.5.7 固定 S-ALP | 第39页 |
| 2.2.5.8 电化学信号的检测 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-62页 |
| 3.1 DNA 甲基化及 DNA 甲基转移酶活性的电化学分析 | 第40-43页 |
| 3.1.1 不同修饰电极电化学行为研究 | 第40页 |
| 3.1.2 DNA 甲基化时间的优化 | 第40-41页 |
| 3.1.3 T.aqI 甲基酶活性的检测 | 第41-42页 |
| 3.1.4 漆黄素对 T.aqI 甲基酶活性的影响 | 第42页 |
| 3.1.5 DNA 甲基化位点的测定 | 第42-43页 |
| 3.2 甲基化灵敏性内切检测 DNA 甲基化 | 第43-48页 |
| 3.2.1 不同修饰电极的阻抗表征 | 第43-44页 |
| 3.2.2 实验可行性检测 | 第44-46页 |
| 3.2.3 Dam 甲基酶活性的检测 | 第46-47页 |
| 3.2.4 不同的抑制剂对 Dam 甲基酶活性的影响 | 第47-48页 |
| 3.3 基于滚环复制放大技术检测 DNA 甲基化 | 第48-51页 |
| 3.3.1 实验可行性检测 | 第48-49页 |
| 3.3.2 实验条件的优化 | 第49-50页 |
| 3.3.3 M. SssI 酶活性的研究 | 第50页 |
| 3.3.4 紫杉醇对 M. SssI 酶活性的影响 | 第50-51页 |
| 3.4 电化学免疫传感器检测 DNA 甲基化及农药对甲基转移酶活性的研究 | 第51-55页 |
| 3.4.1 不同修饰电极电化学表征 | 第51-52页 |
| 3.4.2 实验可行性研究 | 第52-53页 |
| 3.4.3 M. SssI 酶活性的检测 | 第53-55页 |
| 3.4.4 农药对 DNA 甲基转移酶活性的影响 | 第55页 |
| 3.5 基于发夹 DNA 循环杂交扩增技术检测 DNA 甲基化 | 第55-62页 |
| 3.5.1 不同修饰电极的交流阻抗表征 | 第55-57页 |
| 3.5.2 不同修饰电极电化学行为研究 | 第57-58页 |
| 3.5.3 发卡 DNA 循环杂交时间和 DNA 甲基化时间的优化 | 第58页 |
| 3.5.4 甲基转移酶浓度的研究 | 第58-59页 |
| 3.5.5 抑制剂对 M.SssI 活性的研究 | 第59-60页 |
| 3.5.6 环境激素对 M.SssI 活性的促进作用 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-66页 |
| 4.1 DNA 甲基化及 DNA 甲基转移酶活性的电化学分析 | 第62页 |
| 4.2 甲基化灵敏性内切检测 DNA 甲基化 | 第62-63页 |
| 4.3 基于滚环复制放大技术检测 DNA 甲基化 | 第63-64页 |
| 4.4 电化学免疫传感器检测 DNA 甲基化及农药对甲基转移酶活性的研究 | 第64-65页 |
| 4.5 基于发夹 DNA 循环杂交扩增技术检测 DNA 甲基化 | 第65-66页 |
| 5 结论 | 第66-68页 |
| 5.1 DNA 甲基化及 DNA 甲基转移酶活性的电化学分析 | 第66页 |
| 5.2 甲基化灵敏性内切检测 DNA 甲基化 | 第66页 |
| 5.3 基于滚环复制放大技术检测 DNA 甲基化 | 第66页 |
| 5.4 电化学免疫传感器检测 DNA 甲基化及农药对甲基转移酶活性的研究 | 第66-67页 |
| 5.5 基于发夹 DNA 循环杂交扩增技术检测 DNA 甲基化 | 第67-68页 |
| 6 创新之处 | 第68-69页 |
| 7 参考文献 | 第69-79页 |
| 8 致谢 | 第79-80页 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 | 第80-81页 |
