| 摘要 | 第3-5页 |
| Summary | 第5-7页 |
| 英文缩略表 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 异种器官移植概述 | 第12-16页 |
| 1.1 器官移植简介 | 第12页 |
| 1.2 异种器官移植面临的免疫排斥问题 | 第12-13页 |
| 1.3 异种移植中补体介导的免疫排斥反应 | 第13-14页 |
| 1.4 GGTA1、hCD46、hCD59和hCD55基因在异种器官移植中的应用 | 第14-16页 |
| 1.5 巴马小型猪 | 第16页 |
| 2 hCD55基因简介及其在本实验中的应用策略 | 第16-17页 |
| 3 CRISPR/Cas9技术及Rosa26位点简介 | 第17-18页 |
| 4 Cre/loxP系统在本实验中的应用 | 第18页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 hCD55和hCD46双补体转基因克隆猪的制备 | 第20-30页 |
| 前言 | 第20页 |
| 1 材料与方法 | 第20-24页 |
| 1.1 实验材料 | 第20页 |
| 1.2 表达载体pCAG-hCD55的构建 | 第20-22页 |
| 1.2.1 引物设计与合成 | 第20-22页 |
| 1.2.2 表达载体pCAG-hCD55的构建 | 第22页 |
| 1.2.3 载体 pCAG-hCD55 的鉴定 | 第22页 |
| 1.2.4 载体 pCAG-hCD55 线性化 | 第22页 |
| 1.3 阳性克隆点细胞转染、筛选及鉴定 | 第22-23页 |
| 1.4 转基因克隆胚胎的重构及胚胎移植 | 第23-24页 |
| 1.5 转hCD55基因仔猪鉴定 | 第24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-29页 |
| 2.1 pCAG-hCD55载体验证 | 第24-25页 |
| 2.2 阳性克隆点细胞DNA整合鉴定结果 | 第25页 |
| 2.3 阳性克隆点细胞RT-PCR鉴定 | 第25-26页 |
| 2.4 转基因克隆胚胎移植效率检测 | 第26-27页 |
| 2.5 转hCD55基因仔猪鉴定 | 第27-29页 |
| 2.5.1 仔猪DNA整合鉴定 | 第27页 |
| 2.5.2 RT-PCR鉴定转基因猪耳组织hCD55基因的表达 | 第27-28页 |
| 2.5.3 qPCR检测各组织hCD55基因的表达 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 猪Rosa26位点敲入Loxp修饰的hCD55成纤维细胞系的建立 | 第30-42页 |
| 前言 | 第30页 |
| 1 材料与方法 | 第30-35页 |
| 1.1 实验材料和主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.2 Rosa26 打靶载体构建 | 第31-32页 |
| 1.3 表达hCD55的同源重组载体构建 | 第32-33页 |
| 1.4 细胞转染 | 第33页 |
| 1.5 打靶效率验证与细胞筛选 | 第33页 |
| 1.6 PCR检测目的基因整合情况 | 第33-34页 |
| 1.7 RT-PCR检测细胞表达情况 | 第34页 |
| 1.8 标记基因的删除 | 第34-35页 |
| 1.9 Westernblot检测hCD55基因表达情况 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-40页 |
| 2.1 PX330-Rosa26打靶载体与表达hCD55的同源重组载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.2 PX330-Rosa26基因编辑效率检测 | 第36-37页 |
| 2.3 PCR鉴定目的片段整合情况 | 第37-38页 |
| 2.4 RT-PCR鉴定hCD55在不同克隆点的表达情况 | 第38-39页 |
| 2.5 Hyg抗性标记的删除 | 第39-40页 |
| 2.6 Westernblot鉴定克隆点中hCD55的表达情况 | 第40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 附录A | 第48-51页 |
| 致谢 | 第51-53页 |
| 作者简介 | 第53-54页 |
| 导师简介 | 第54-55页 |
