| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-16页 |
| 1.1 引言 | 第10-11页 |
| 1.2 国内外研究现状和进展 | 第11-15页 |
| 1.2.1 柑橘遗传转化研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2.2 荧光实时定量PCR的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.3 利用实时定量PCR检测转基因植物拷贝数的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.4 实时定量PCR在植物上的其他应用 | 第14-15页 |
| 1.3 本研究的目的和内容 | 第15-16页 |
| 2 材料和方法 | 第16-26页 |
| 2.1 试验材料 | 第16页 |
| 2.2 主要生化试剂 | 第16页 |
| 2.3 转基因植株的PCR检测 | 第16-18页 |
| 2.3.1 柑橘基因组小量法提取DNA | 第16-17页 |
| 2.3.2 外源基因的扩增 | 第17-18页 |
| 2.4 转基因材料的Southern blot检测 | 第18-22页 |
| 2.4.1 CTAB大量法提取DNA | 第18页 |
| 2.4.2 地高辛标记法Southern杂交技术 | 第18-22页 |
| 2.5 利用同源序列克隆的方法获得PtLTP序列 | 第22-24页 |
| 2.5.1 总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.5.2 cDNA第一链合成 | 第22页 |
| 2.5.3 目的片段的PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2.5.4 PCR产物回收 | 第23页 |
| 2.5.5 TA克隆 | 第23页 |
| 2.5.6 转化及测序 | 第23-24页 |
| 2.5.7 序列分析 | 第24页 |
| 2.6 Real-time PCR分析拷贝数 | 第24-26页 |
| 2.6.1 引物和探针 | 第24页 |
| 2.6.2 实时PCR条件 | 第24-25页 |
| 2.6.3 标准曲线的制备 | 第25页 |
| 2.6.4 转基因拷贝数的计算 | 第25-26页 |
| 3 结果和分析 | 第26-37页 |
| 3.1 PCR和Southern blot杂交分析 | 第26-28页 |
| 3.2 PtLTP基因片段的克隆 | 第28-29页 |
| 3.3 标准曲线的绘制 | 第29-30页 |
| 3.4 利用荧光实时定量PCR检测外源基因的拷贝数 | 第30-33页 |
| 3.5 MAC12.2和NPTⅡ基因的重组 | 第33-34页 |
| 3.6 利用荧光实时定量PCR检测外源基因方法的评价 | 第34-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 4.1 荧光实时定量PCR检测转基因植株拷贝数的效果 | 第37页 |
| 4.2 外源基因的重组 | 第37-38页 |
| 4.3 应用TaqMan技术检测转基因植株拷贝数的影响因素 | 第38-39页 |
| 4.3.1 内参基因的选择 | 第38页 |
| 4.3.2 重复性问题 | 第38页 |
| 4.3.3 Ct值的影响 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-45页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46页 |
