| 目录 | 第3-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第9-23页 |
| 第一节 Expansin的发现和作用机制 | 第9-13页 |
| 1 植物细胞壁的"酸生长"现象 | 第9页 |
| 2 Expansin的发现 | 第9-10页 |
| 3 Expansin-like蛋白的发现 | 第10-11页 |
| 4 Expansin的蛋白结构 | 第11页 |
| 5 Expansin的作用机制 | 第11-13页 |
| 第二节 多糖降解酶和expansin蛋白的异源重组表达研究概况 | 第13-19页 |
| 1 在细菌中的表达情况 | 第14-15页 |
| 2 在酵母中的表达情况 | 第15-17页 |
| 2.1 在酵母表达系统中的表达 | 第15-17页 |
| 2.2 在毕赤酵母中的表达情况 | 第17页 |
| 3 纤维素酶在丝状真菌中的表达 | 第17-18页 |
| 4 各种表达系统表达纤维素酶的优缺点比较 | 第18-19页 |
| 第三节 本论文研究的目的和主要内容 | 第19-23页 |
| 第二章 木霉来源的未知expansin-like蛋白的E.coli异源重组表达 | 第23-43页 |
| 第一节 木霉来源的未知expansin-like蛋白Tre1原核异源重组表达载体构建 | 第23-29页 |
| 1 材料与方法 | 第23-28页 |
| 1.1 材料 | 第23-24页 |
| 1.1.1 菌种 | 第23页 |
| 1.1.2 质粒 | 第23-24页 |
| 1.1.3 培养基 | 第24页 |
| 1.2 主要试剂及来源 | 第24页 |
| 1.3 主要仪器设备及其来源 | 第24-25页 |
| 1.4 实验方法 | 第25-28页 |
| 1.4.1 引物设计与合成 | 第25页 |
| 1.4.2 不含信号肽的Tre1 cDNA的PCR扩增 | 第25-26页 |
| 1.4.3 琼脂糖凝胶电泳胶回收DNA片段 | 第26页 |
| 1.4.4 TB法(Terrific Broth)抽提质粒 | 第26-27页 |
| 1.4.5 CaCl_2法制备感受态细胞 | 第27页 |
| 1.4.6 DNA连接反应 | 第27页 |
| 1.4.7 感受态细胞的热激转化和稀释涂布 | 第27-28页 |
| 1.4.8 重组菌的筛选和鉴定 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-29页 |
| 第二节 Tre1基因的原核重组表达及其分离纯化 | 第29-41页 |
| 1 材料与方法 | 第29-35页 |
| 1.1 材料 | 第29-30页 |
| 1.1.1 菌种 | 第29页 |
| 1.1.2 培养基 | 第29-30页 |
| 1.2 主要试剂及来源 | 第30页 |
| 1.3 主要仪器设备及其来源 | 第30-31页 |
| 1.4 实验方法 | 第31-35页 |
| 1.4.1 重组菌的诱导表达 | 第31页 |
| 1.4.2 粗蛋白的制备 | 第31-32页 |
| 1.4.3 亲和层析纯化带有His-tag标签的目的蛋白 | 第32页 |
| 1.4.4 透析法将初步纯化的重组酶进一步提纯 | 第32-33页 |
| 1.4.5 DNS法测Tre1水解酶活性 | 第33页 |
| 1.4.6 蛋白浓度测定 | 第33-34页 |
| 1.4.7 SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第34页 |
| 1.4.8 Western blot | 第34-35页 |
| 2 结果与讨论 | 第35-41页 |
| 2.1 Tre1在E.coli中的重组表达 | 第35-37页 |
| 2.2 重组酶Tre1粗酶液的活性测定与纯化 | 第37-38页 |
| 2.3 Tre1 opt1基因在E.coli表达系统的表达情况 | 第38-40页 |
| 2.4 重组表达Tre1蛋白肽指纹图谱分析 | 第40-41页 |
| 第三节 本章小结 | 第41-43页 |
| 第三章 木霉来源的未知expansin-like蛋白在毕赤酵母中的重组表达 | 第43-57页 |
| 第一节 木霉来源的未知expansin-like蛋白Tre1原核异源重组表达载体构建 | 第43-50页 |
| 1 材料与方法 | 第43-47页 |
| 1.1 材料 | 第43-44页 |
| 1.1.1 菌种和质粒 | 第43-44页 |
| 1.1.2 培养基 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂及来源 | 第44-45页 |
| 1.3 主要仪器设备及其来源 | 第45页 |
| 1.4 实验方法 | 第45-47页 |
| 1.4.1 采用TB法(Terrific Broth)大量抽提质粒 | 第45-46页 |
| 1.4.2 毕赤酵母氯化锂转化法 | 第46-47页 |
| 1.4.3 筛选Mut~+及Mut~s转化子 | 第47页 |
| 1.4.4 酵母基因组提取 | 第47页 |
| 2 结果与讨论 | 第47-50页 |
| 2.1 木霉来源的未知expansin-like蛋白Tre1毕赤酵母表达质粒的构建 | 第47-50页 |
| 第二节 Tre1在毕赤酵母表达系统中的重组表达 | 第50-56页 |
| 1 材料与方法 | 第50-52页 |
| 1.1 材料 | 第50页 |
| 1.1.1 菌种 | 第50页 |
| 1.1.2 培养基 | 第50页 |
| 1.1.3 裂解缓冲液 | 第50页 |
| 1.2 主要试剂及来源 | 第50-51页 |
| 1.3 主要仪器设备及其来源 | 第51页 |
| 1.4 实验方法 | 第51-52页 |
| 1.4.1 pPICZαA-Tre1-GS115重组酵母菌Mut~+的分泌表达 | 第51-52页 |
| 1.4.2 毕赤酵母细胞裂解 | 第52页 |
| 2 结果与讨论 | 第52-56页 |
| 2.1 Tre1在毕赤酵母表达系统中的重组表达 | 第52-54页 |
| 2.2 Tre opt1在毕赤酵母表达系统中的重组表达 | 第54-56页 |
| 第三节 本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 Tre1基因在里氏木霉表达系统异源重组表达体系的构建 | 第57-67页 |
| 第一节 Tre1基因在里氏木霉表达系统异源重组表达体系的构建 | 第57-66页 |
| 1 材料与方法 | 第57-64页 |
| 1.1 材料 | 第57-58页 |
| 1.1.1 菌种和质粒 | 第57页 |
| 1.1.2 培养基 | 第57-58页 |
| 1.2 主要试剂及来源 | 第58-59页 |
| 1.3 主要仪器设备及其来源 | 第59-60页 |
| 1.4 实验方法 | 第60-64页 |
| 1.4.1 T.reesei的培养 | 第60页 |
| 1.4.2 T.reesei基因组DNA的制备 | 第60页 |
| 1.4.3 PCR扩增获得CBHI启动子序列及终止序列 | 第60-61页 |
| 1.4.4 overlap PCR构建pCBHI-Tre1/pAN7-1表达载体 | 第61-64页 |
| 2 结果与讨论 | 第64-66页 |
| 第二节 本章小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
