| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACTS | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-29页 |
| 1.1 植物抗旱及耐盐研究现状 | 第13-16页 |
| 1.1.1 干旱和盐渍对植物的危害 | 第13-14页 |
| 1.1.2 植物的抗旱和耐盐机制 | 第14-16页 |
| 1.2 Pro与植物抗逆性 | 第16-20页 |
| 1.2.1 Pro的生物合成 | 第16-18页 |
| 1.2.2 P5CS基因的克隆、表达模式及植物转化研究 | 第18-20页 |
| 1.3 CBL-CIPK信号传导系统与植物的抗逆性 | 第20-25页 |
| 1.3.1 CBL-CIPK信号传导系统简介 | 第20-21页 |
| 1.3.2 CBL-CIPK信号传导系统的主要功能 | 第21-24页 |
| 1.3.3 CIPK基因的表达模式分析及植物转化研究 | 第24-25页 |
| 1.4 唐古特白刺研究进展 | 第25-28页 |
| 1.4.1 唐古特白刺的生态价值 | 第26页 |
| 1.4.2 唐古特白刺的化学成分 | 第26-27页 |
| 1.4.3 唐古特白刺抗逆生理及分子机制 | 第27-28页 |
| 1.5 本论文的研究意义 | 第28-29页 |
| 第二章 唐古特白刺NtP5CS与NtCIPK2基因全长cDNA克隆及特性分析 | 第29-49页 |
| 2.1 材料和方法 | 第29-30页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第29页 |
| 2.1.2 试剂与药品 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-38页 |
| 2.2.1 植物培养与胁迫处理 | 第30页 |
| 2.2.2 RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.4 cDNA第一链的合成 | 第31页 |
| 2.2.5 简并引物的设计 | 第31页 |
| 2.2.6 唐古特白刺P5CS基因和CIPK基因cDNA片段的克隆 | 第31-32页 |
| 2.2.7 PCR产物的凝胶回收及TA克隆 | 第32-33页 |
| 2.2.8 利用RACE技术克隆唐古特白刺P5CS基因和CIPK基因的末端序列 | 第33-34页 |
| 2.2.9 序列拼接及生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 2.2.10 亚细胞定位研究 | 第35-38页 |
| 2.3 结果与分析 | 第38-48页 |
| 2.3.1 唐古特白刺总RNA质量检测 | 第38页 |
| 2.3.2 唐古特白刺NtP5CS、NtCIPK2基因保守区的克隆 | 第38-40页 |
| 2.3.3 唐古特白刺NtP5CS、NtCIPK2基因全长cDNA的克隆 | 第40-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-49页 |
| 第三章 NtP5CS、NtCIPK2基因启动子的克隆与表达模式分析 | 第49-63页 |
| 3.1 材料和方法 | 第49-50页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第49页 |
| 3.1.2 试剂与药品 | 第49-50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-54页 |
| 3.2.1 植物培养与基因组DNA提取 | 第50-51页 |
| 3.2.2 利用SiteFinding-PCR技术克隆NtP5CS与NtCIPK2基因的启动子 | 第51-52页 |
| 3.2.3 NtP5CS、NtCIPK2启动子序列分析 | 第52页 |
| 3.2.4 NtP5CS、NtCIPK2基因的表达模式分析 | 第52-54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-61页 |
| 3.3.1 NtP5CS、NtCIPK2启动子的克隆 | 第54-55页 |
| 3.3.2 NtP5CS、NtCIPK2启动子的序列分析 | 第55-59页 |
| 3.3.3 NtP5CS基因表达模式分析及Pro含量测定 | 第59-60页 |
| 3.3.4 NtCIPK2基因表达模式分析 | 第60-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-63页 |
| 3.4.1 NtP5CS、NtCIPK2基因的转录调控 | 第61-62页 |
| 3.4.2 NtP5CS、NtCIPK2基因的表达与唐古特白刺的生境适应性 | 第62-63页 |
| 第四章 NtP5CS、NtCIPK2基因的原核表达及在大肠杆菌中的功能鉴定 | 第63-74页 |
| 4.1 材料和方法 | 第63-64页 |
| 4.1.1 质粒 | 第63页 |
| 4.1.2 试剂与药品 | 第63-64页 |
| 4.2 实验方法 | 第64-67页 |
| 4.2.1 原核表达载体的构建策略 | 第64页 |
| 4.2.2 NtP5CS、AtP5CS、NtCIPK2基因ORF序列的扩增和回收 | 第64-65页 |
| 4.2.3 pGEX-4T-1质粒和PCR产物的酶切 | 第65页 |
| 4.2.4 pGEX-4T-1质粒和PCR产物的酶切片段的连接与转化 | 第65页 |
| 4.2.5 重组质粒的鉴定和转化表达菌株 | 第65页 |
| 4.2.6 重组蛋白的诱导表达 | 第65-66页 |
| 4.2.7 SDS-PAGE电泳检测 | 第66-67页 |
| 4.2.8 大肠杆菌对非生物胁迫的抗性分析 | 第67页 |
| 4.3 结果与分析 | 第67-72页 |
| 4.3.1 NtP5CS、AtP5CS、NtCIPK2基因ORF序列的扩增 | 第67-68页 |
| 4.3.2 NtP5CS、AtP5CS、NtCIPK2基因原核表达载体的构建 | 第68-69页 |
| 4.3.3 重组蛋白的诱导表达 | 第69-70页 |
| 4.3.4 大肠杆菌的抗逆性分析 | 第70-72页 |
| 4.4 讨论 | 第72-74页 |
| 4.4.1 大肠杆菌用于初步研究植物抗逆基因功能 | 第72页 |
| 4.4.2 基因来源与抗逆能力的相关性 | 第72-74页 |
| 第五章 NtP5CS,NtCIPK2基因在拟南芥、紫花苜蓿中的遗传转化及功能分析 | 第74-93页 |
| 5.1 材料和方法 | 第74-75页 |
| 5.1.1 植物材料、菌种及质粒 | 第74-75页 |
| 5.1.2 试剂与药品 | 第75页 |
| 5.2 实验方法 | 第75-82页 |
| 5.2.1 植物表达载体的构建策略 | 第75-76页 |
| 5.2.2 NtP5CS、NtCIPK2基因ORF序列的扩增和回收 | 第76页 |
| 5.2.3 pPZP221质粒和PCR产物的酶切 | 第76页 |
| 5.2.4 pPZP221质粒和PCR产物的酶切片段的连接与转化 | 第76页 |
| 5.2.5 农杆菌的转化 | 第76-77页 |
| 5.2.6 拟南芥的遗传转化 | 第77-79页 |
| 5.2.7 转基因拟南芥的分子生物学鉴定 | 第79页 |
| 5.2.8 转基因拟南芥的抗逆性分析 | 第79-81页 |
| 5.2.9 紫花苜蓿的遗传转化 | 第81-82页 |
| 5.2.10 紫花苜蓿再生植株的分子检测 | 第82页 |
| 5.3 结果与分析 | 第82-91页 |
| 5.3.1 植物表达载体的构建 | 第82-83页 |
| 5.3.2 转基因拟南芥的PCR和RT-PCR鉴定 | 第83-84页 |
| 5.3.3 转基因拟南芥的萌发率分析 | 第84页 |
| 5.3.4 转基因拟南芥的根长分析 | 第84-85页 |
| 5.3.5 转基因拟南芥幼苗的生长状况 | 第85-86页 |
| 5.3.6 转基因拟南芥抗逆指标的测定 | 第86-89页 |
| 5.3.7 紫花苜蓿抗性转化植株的获得 | 第89页 |
| 5.3.8 紫花苜蓿抗性转化植株的PCR和RT-PCR鉴定 | 第89-91页 |
| 5.4 讨论 | 第91-93页 |
| 第六章 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-110页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
