| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-27页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第12页 |
| 1.2 文献综述 | 第12-26页 |
| 1.2.1 都柏林沙门氏菌病的研究概况 | 第12-19页 |
| 1.2.2 沙门氏菌疫苗研究进展 | 第19-22页 |
| 1.2.3 Red同源重组技术 | 第22-26页 |
| 1.3 研究的目的与意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和细胞系 | 第27页 |
| 2.1.2 药品与试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.3 主要培养基及其配制 | 第28页 |
| 2.1.4 主要试剂与缓冲液的配制 | 第28-29页 |
| 2.1.5 本实验所用PCR引物 | 第29-30页 |
| 2.1.6 实验动物 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-42页 |
| 2.2.1 都柏林沙门氏菌缺失株的构建 | 第30-34页 |
| 2.2.2 都柏林沙门氏菌缺失株生物学特性鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.3 都柏林沙门氏菌缺失株对小鼠的毒力实验 | 第35页 |
| 2.2.4 都柏林沙门氏菌缺失株粘附力与侵袭力鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.5 都柏林沙门氏菌缺失株对小鼠的免疫原性实验 | 第36-39页 |
| 2.2.6 都柏林沙门氏菌缺失株对小鼠的免疫保护实验 | 第39-40页 |
| 2.2.7 都柏林沙门氏菌缺失株对小鼠的交叉保护实验 | 第40页 |
| 2.2.8 菌株与树突状细胞的相互作用 | 第40-41页 |
| 2.2.9 统计学分析 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-56页 |
| 3.1 都柏林沙门氏菌ΔphoQ单缺失株、ΔphoQ-ΔrpoS双缺失株的构建 | 第42-44页 |
| 3.1.1 同源臂构建 | 第42页 |
| 3.1.2 PCR鉴定质粒pKD46转入目的菌株 | 第42页 |
| 3.1.3 第一次同源重组菌ΔphoQ::cat、ΔphoQ-ΔrpoS::cat的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.1.4 第二次重组菌ΔphoQ、ΔphoQ-ΔrpoS的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2 都柏林沙门氏菌缺失株生物学特性鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.1 都柏林沙门氏菌缺失株生长特性鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.2 都柏林沙门氏菌缺失株生化特性鉴定 | 第45页 |
| 3.3 都柏林沙门氏菌缺失株对小鼠的毒力试验 | 第45-46页 |
| 3.4 都柏林沙门氏菌缺失株对HEp-2细胞的粘附与侵袭 | 第46-47页 |
| 3.4.1 都柏林沙门氏菌缺失株对HEp-2细胞的粘附 | 第46页 |
| 3.4.2 都柏林沙门氏菌缺失株对HEp-2细胞的侵袭 | 第46-47页 |
| 3.5 都柏林沙门氏菌缺失株免疫原性检测 | 第47-50页 |
| 3.5.1 都柏林沙门氏菌IgG抗体水平检测 | 第47页 |
| 3.5.2 血清中细胞因子的检测 | 第47-48页 |
| 3.5.3 沙门氏菌菌体抗原刺激淋巴细胞增殖分析 | 第48-49页 |
| 3.5.4 免疫小鼠的CD4~+T细胞水平分析 | 第49-50页 |
| 3.6 都柏林沙门氏菌缺失株免疫保护试验 | 第50-52页 |
| 3.7 缺失株的交叉保护试验 | 第52页 |
| 3.8 不同菌株与树突状细胞的相互作用 | 第52-56页 |
| 3.8.1 感染不同菌株后树突状细胞分泌IFN-γ的检测 | 第52-53页 |
| 3.8.2 感染不同菌株后树突状细胞分泌TNF-α的检测 | 第53页 |
| 3.8.3 感染不同菌株后树突状细胞分泌IL-10的检测 | 第53-54页 |
| 3.8.4 感染不同菌株后树突状细胞分泌IL-12p70的检测 | 第54页 |
| 3.8.5 感染不同菌株后树突状细胞分泌IL-23的检测 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-62页 |
| 4.1 Red重组系统的应用 | 第56页 |
| 4.2 phoQ、rpoS缺失对毒力的影响 | 第56-57页 |
| 4.3 phoQ、rpoS缺失对免疫原性的影响 | 第57-61页 |
| 4.4 缺失株的交叉保护力 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
