| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-28页 |
| 1 阿特拉津 | 第14-18页 |
| 1.1 阿特拉津理化性质 | 第14页 |
| 1.2 阿特拉津的应用与除草原理 | 第14-15页 |
| 1.2.1 阿特拉津在国内外的使用现状 | 第14-15页 |
| 1.2.2 阿特拉津的除草原理 | 第15页 |
| 1.3 阿特拉津的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.3.1 阿特拉津在世界及我国的污染情况 | 第15-16页 |
| 1.3.2 阿特拉津对生物的毒性作用 | 第16-17页 |
| 1.3.3 阿特拉津的降解代谢 | 第17-18页 |
| 2 甲基转移酶 | 第18-20页 |
| 2.1 甲基转移酶的简介 | 第18-19页 |
| 2.2 甲基转移酶的功能 | 第19页 |
| 2.3 甲基转移酶的作用机制 | 第19-20页 |
| 2.4 甲基转移酶的研究进展概述 | 第20页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 参考文献 | 第22-28页 |
| 第二章 阿特拉津诱导下水稻甲基转移酶基因的表达和生物信息学分析 | 第28-54页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| 1.1 植物材料 | 第29-30页 |
| 1.2 实验药品及试剂 | 第30页 |
| 1.3 实验仪器 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-36页 |
| 2.1 植物材料的处理 | 第30-31页 |
| 2.2 样品制备、高通量测序和基因芯片 | 第31-32页 |
| 2.2.1 水稻幼苗地上部分及地下部分组织总RNA的提取 | 第31页 |
| 2.2.2 高通量测序(High-throughput sequencing) | 第31-32页 |
| 2.2.3 基因芯片(Microarray) | 第32页 |
| 2.3 荧光定量PCR (qRT-PCR)分析 | 第32-35页 |
| 2.3.1 样品RNA的制备 | 第32-33页 |
| 2.3.2 Real-Time PCR引物设计 | 第33-34页 |
| 2.3.3 RNA反转录合成cDNA第一条链 | 第34-35页 |
| 2.3.4 实时荧光定量PCR反应 | 第35页 |
| 2.4 进化树和结构域分析 | 第35-36页 |
| 2.5 基因启动子顺式作用元件预测和染色体定位 | 第36页 |
| 2.6 水稻幼苗氧甲基转移酶活力的测定 | 第36页 |
| 3. 结果与分析 | 第36-49页 |
| 3.1 高通量测序数据及结果分析 | 第36-39页 |
| 3.2 基因芯片结果与分析 | 第39-41页 |
| 3.3 实时荧光定量PCR验证 | 第41-43页 |
| 3.4 水稻甲基转移酶基因系统进化分析 | 第43-45页 |
| 3.5 水稻MT基因的染色体定位分析 | 第45-46页 |
| 3.6 水稻MT基因结构域的预测 | 第46-47页 |
| 3.7 水稻MT基因启动子顺式作用元件分析 | 第47-49页 |
| 3.8 阿特拉津对水稻幼苗氧甲基转移酶总活力的影响 | 第49页 |
| 4 本章小结 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 第三章 两个O-水稻甲基转移酶基因真核表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达 | 第54-74页 |
| 1 材料 | 第55-56页 |
| 1.1 实验材料 | 第55页 |
| 1.2 实验试剂 | 第55页 |
| 1.3 实验仪器 | 第55-56页 |
| 2 实验方法 | 第56-65页 |
| 2.1 pEasy-blunt-LOC_Os04g09604,pEasy-blunt-LOC_Os11g15040原核表达载体的构建 | 第56-59页 |
| 2.1.1 水稻总cDNA的获得 | 第56页 |
| 2.1.2 LOC_Os04g09604和LOC_Os11g15040基因扩增 | 第56-57页 |
| 2.1.3 目的片段的回收 | 第57页 |
| 2.1.4 目的片段与T载体的连接 | 第57页 |
| 2.1.5 连接产物和质粒pPICZα的转化 | 第57-58页 |
| 2.1.6 大肠杆菌阳性克隆的筛选和鉴定 | 第58页 |
| 2.1.7 重组质粒pEasy-blunt-MT和pPICZα质粒的提取和鉴定 | 第58-59页 |
| 2.2 pPICZα-LOC_Os04g09604,pPICZα-LOC_Os11g15040真核表达载体的构建 | 第59-61页 |
| 2.2.1 重组质粒克隆载体和pPICZα克隆载体的双酶切 | 第59页 |
| 2.2.2 连接、转化、大肠杆菌阳性克隆的筛选及重组质粒的提取 | 第59-60页 |
| 2.2.3 重组表达载体的鉴定 | 第60-61页 |
| 2.3 重组表达载体转化到毕赤酵母中 | 第61-62页 |
| 2.3.1 重组质粒的线性化 | 第61页 |
| 2.3.2 酵母感受态细胞的制备 | 第61页 |
| 2.3.3 毕赤酵母X-33的电击转化 | 第61-62页 |
| 2.4 重组酵母的PCR检测 | 第62-63页 |
| 2.4.1 毕赤酵母质粒的提取 | 第62-63页 |
| 2.4.2 质粒DNA的PCR检测 | 第63页 |
| 2.5 重组蛋白的诱导表达 | 第63-64页 |
| 2.6 重组蛋白的SDS-PAGE分析和酶活力测定 | 第64页 |
| 2.6.1 样品的提取 | 第64页 |
| 2.6.2 重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第64页 |
| 2.6.3 重组蛋白酶活力的测定 | 第64页 |
| 2.7 重组酵母菌株对阿特拉津抗性的分析 | 第64-65页 |
| 2.7.1 重组酵母的过表达 | 第64-65页 |
| 2.7.2 重组酵母对阿特拉津的降解 | 第65页 |
| 3. 结果与讨论 | 第65-70页 |
| 3.1 MT基因PCR扩增的结果与分析 | 第65-66页 |
| 3.2 pEasy-blunt-MT和pPICZα大肠杆菌阳性克隆的筛选及鉴定 | 第66页 |
| 3.3 重组pEasy-blunt-MT质粒和pPICZα质粒的双酶切结果与分析 | 第66-67页 |
| 3.4 重组表达载体pPICZα-MT的鉴定结果与分析 | 第67-68页 |
| 3.5 重组酵母菌株X-33的筛选和鉴定结果 | 第68页 |
| 3.6 重组蛋白在毕赤酵母X-33中的表达结果与分析 | 第68-70页 |
| 3.6.1 重组蛋白的SDS-PAGE和重组蛋白酶活力分析 | 第68-69页 |
| 3.6.2 O-methyltransferase在酵母菌株中的过表达分析 | 第69页 |
| 3.6.3 重组酵母菌株对ATR的降解 | 第69-70页 |
| 4 本章小结 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
| 第四章 O-甲基转移酶O-MT的同源建模、分子对接及其介导下阿特拉津的降解代谢 | 第74-92页 |
| 1 材料 | 第75-76页 |
| 1.1 供试材料 | 第75页 |
| 1.2 实验药品及试剂 | 第75-76页 |
| 1.3 实验仪器和所用软件 | 第76页 |
| 2 实验方法 | 第76-79页 |
| 2.1 同源模型的建立 | 第76-77页 |
| 2.2 分子对接 | 第77页 |
| 2.3 O-MT介导下ATR在水稻幼苗中的降解代谢 | 第77-78页 |
| 2.3.1 水稻幼苗的培养及处理 | 第77页 |
| 2.3.2 样品的提取 | 第77页 |
| 2.3.3 超高效液相色谱串联质谱检测 | 第77-78页 |
| 2.4 O-MT介导下ATR在重组酵母菌株中的降解代谢 | 第78-79页 |
| 2.4.1 重组酵母菌株的培养 | 第78页 |
| 2.4.2 样品的提取 | 第78页 |
| 2.4.3 超高效液相色谱串联质谱检测 | 第78-79页 |
| 3 结果与分析 | 第79-88页 |
| 3.1 同源建模和分子对接 | 第79-83页 |
| 3.2 O-MT介导下ATR在水稻幼苗中的降解代谢 | 第83-87页 |
| 3.3 O-MT介导下ATR在重组酵母菌株中的降解代谢 | 第87-88页 |
| 4 本章小结 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-92页 |
| 全文总结 | 第92-94页 |
| 论文创新点 | 第94页 |
| 论文不足之处 | 第94-96页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
