| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 化脓隐秘杆菌感染 | 第11页 |
| 1.2 化脓隐秘杆菌 | 第11-12页 |
| 1.2.1 化脓隐秘杆菌生物学特性 | 第11-12页 |
| 1.2.2 化脓隐秘杆菌主要毒力因子 | 第12页 |
| 1.3 溶血素 | 第12-15页 |
| 1.3.1 PLO在化脓隐秘杆菌感染中的重要性 | 第13页 |
| 1.3.2 PLO的基因和产生机制 | 第13-15页 |
| 1.4 胆固醇依赖性的溶细胞素与溶血素 | 第15-17页 |
| 1.4.1 Cholesterol-Dependent Cytolysins | 第15页 |
| 1.4.2 PLO与CDCs | 第15-17页 |
| 1.5 CDC成孔毒素的成孔机制 | 第17-20页 |
| 1.5.1 CDC分子结构 | 第17-18页 |
| 1.5.2 CDC的成孔机制简述 | 第18-20页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 试验动物、细胞 | 第21页 |
| 2.1.2 菌种与质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 引物设计与合成 | 第21-22页 |
| 2.1.4 Oligo片段合成 | 第22-23页 |
| 2.1.5 点突变引物设计 | 第23-24页 |
| 2.1.6 主要试剂及抗体 | 第24-25页 |
| 2.1.7 主要溶液的配制 | 第25-26页 |
| 2.1.8 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 重组蛋白的诱导表达 | 第27页 |
| 2.2.2 抗化脓隐秘杆菌溶血素单克隆抗体的制备 | 第27-29页 |
| 2.2.3 抗化脓隐秘杆菌溶血素单克隆抗体的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.4 溶血素溶血活性及其单抗的抗溶血活性 | 第30-31页 |
| 2.2.5 单抗所针对抗原关键区域的鉴定 | 第31-33页 |
| 2.2.6 溶血素PLO第 58-63位氨基酸对其溶血活性的影响 | 第33-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-54页 |
| 3.1 重组化脓隐秘杆菌溶血素制备 | 第35-37页 |
| 3.1.1 rPLO的原核表达 | 第35页 |
| 3.1.2 重组蛋白的Western-blot鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.3 重组蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| 3.2 抗化脓隐秘杆菌溶血素单克隆抗体的制备及鉴定 | 第37-43页 |
| 3.2.1 抗化脓隐秘杆菌溶血素单克隆抗体的制备 | 第37-38页 |
| 3.2.2 抗化脓隐秘杆菌溶血素单克隆抗体的鉴定 | 第38-43页 |
| 3.3 溶血素溶血活性及其单抗的抗溶血活性 | 第43-45页 |
| 3.3.1 重组蛋白rPLO的溶血活性测定 | 第43页 |
| 3.3.2 天然PLO的溶血活性测定 | 第43-44页 |
| 3.3.3 单抗抗溶血活性测定 | 第44-45页 |
| 3.4 单抗所针对抗原关键区域的鉴定 | 第45-49页 |
| 3.4.1 分段蛋白的表达与鉴定 | 第45-48页 |
| 3.4.2 单抗所针对抗原关键区域分析 | 第48-49页 |
| 3.5 溶血素PLO第 58-63位氨基酸对其溶血功能影响的分析 | 第49-54页 |
| 3.5.1 PLO突变体蛋白的制备和鉴定 | 第49-51页 |
| 3.5.2 PLO突变体蛋白的Western-blot分析 | 第51-52页 |
| 3.5.3 PLO突变体蛋白溶血活性的测定 | 第52-53页 |
| 3.5.4 突变体rPLO-I61A与细胞膜结合的检测 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| 4.1 抗溶血素蛋白单克隆抗体的制备及分析 | 第54页 |
| 4.2 表位关键区域的筛选 | 第54-56页 |
| 4.3 丙氨酸扫描分析PLO分子G58-E63对PLO溶血活性的作用 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
