| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-15页 |
| 1.杆状病毒简介 | 第12-13页 |
| 2.杆状病毒基因研究概况 | 第13-14页 |
| 3. BmNPV相关基因研究进展 | 第14-15页 |
| 第二章 研究内容和实验方案设计 | 第15-18页 |
| 1.研究的主要内容 | 第15-17页 |
| 2.研究的技术路线 | 第17-18页 |
| 第三章 Bm90基因的生物信息学分析 | 第18-22页 |
| 1 生物信息学工具 | 第18页 |
| 2 生物信息学分析结果 | 第18-21页 |
| 2.1 Bm90基因序列分析 | 第18-19页 |
| 2.2 Bm90蛋白的信号肽分析 | 第19页 |
| 2.3 Bm90蛋白的疏水性分析 | 第19-20页 |
| 2.4 Bm90蛋白的跨膜区分析 | 第20-21页 |
| 2.5 Bm90蛋白的二级结构分析 | 第21页 |
| 3 讨论 | 第21-22页 |
| 第四章 重组病毒的构建 | 第22-32页 |
| 1.材料与试剂 | 第22页 |
| 2.实验方法 | 第22-27页 |
| 2.1 重组病毒的构建策略 | 第22-23页 |
| 2.2 Bm90ko-Bacmid的构建 | 第23-25页 |
| 2.3 重组转移载体pFast BacDual-egfp-polh-Bm90的构建 | 第25-27页 |
| 2.4 Bm90re-polh-egfp-Bacmid的构建 | 第27页 |
| 2.5 WtBacmid-polh-egfp和Bm90ko-polh-egfp-Bacmid的构建 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-31页 |
| 3.1 打靶片段的鉴定 | 第27-28页 |
| 3.2 Bm90ko-Bacmid的鉴定 | 第28-29页 |
| 3.3 重组转移载体pFast BacDual-egfp-polh-Bm90的鉴定 | 第29页 |
| 3.4 Bm90re-polh-egfp-Bacmid的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.5 WtBacmid-polh-egfp和Bm90ko-polh-egfp-Bacmid的鉴定 | 第30-31页 |
| 4.讨论 | 第31-32页 |
| 第五章 Bm90基因缺失对病毒增殖及组装的影响 | 第32-38页 |
| 1.材料与试剂 | 第32页 |
| 2.实验方法 | 第32-34页 |
| 2.1 重组病毒基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2 重组病毒基因组DNA转染BmN细胞 | 第33页 |
| 2.3 荧光显微镜观察BmN细胞发病情况 | 第33页 |
| 2.4 子代病毒滴度的测定 | 第33页 |
| 2.5 透射电镜分析子代病毒粒子的组装 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-36页 |
| 3.1 荧光显微镜观察结果与分析 | 第34-35页 |
| 3.2 病毒滴度测定结果与分析 | 第35页 |
| 3.3 透射电镜结果与分析 | 第35-36页 |
| 4.讨论 | 第36-38页 |
| 第六章 Bm90基因缺失对病毒基因组复制及各时期基因转录的影响 | 第38-46页 |
| 1.材料与试剂 | 第38页 |
| 2.实验方法 | 第38-42页 |
| 2.1 细胞中病毒基因组DNA的提取 | 第38页 |
| 2.2 Dpn I消化 | 第38-39页 |
| 2.3 荧光定量PCR分析病毒基因组复制 | 第39-40页 |
| 2.4 细胞总RNA的提取 | 第40页 |
| 2.5 荧光定量PCR分析病毒各时期基因转录 | 第40-42页 |
| 2.6 数据处理 | 第42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-44页 |
| 3.1 标准曲线的测定 | 第42页 |
| 3.2 病毒基因组复制水平的qPCR分析 | 第42-43页 |
| 3.3 病毒各时期基因转录水平的qRT-PCR分析 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第七章 Bm90蛋白的多克隆抗体制备及表达时相分析 | 第46-54页 |
| 1 材料与试剂 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-49页 |
| 2.1 PET-28a-Bm90重组质粒的构建 | 第46-47页 |
| 2.2 Bm90蛋白的诱导表达 | 第47页 |
| 2.3 Bm90蛋白的纯化 | 第47页 |
| 2.4 Bm90蛋白的Western blot鉴定 | 第47-48页 |
| 2.5 BCA法测定蛋白含量 | 第48页 |
| 2.6 多克隆抗体的制备 | 第48页 |
| 2.7 抗体效价的测定 | 第48-49页 |
| 2.8 Bm90蛋白的表达时相 | 第49页 |
| 3.结果与分析 | 第49-53页 |
| 3.1 PET-28a-Bm90重组质粒的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.2 Bm90蛋白的原核表达 | 第50-51页 |
| 3.3 Bm90蛋白纯化后的SDS-PAGE和Western blot鉴定 | 第51-52页 |
| 3.4 Bm90蛋白含量的测定 | 第52页 |
| 3.5 Bm90蛋白表达时相的Western blot检测 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
