| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-32页 |
| ·引言 | 第18-28页 |
| ·研究背景 | 第18-21页 |
| ·植物抗寒研究进展 | 第21-24页 |
| ·WRKY 转录因子概述 | 第24-27页 |
| ·高通量测序技术 | 第27-28页 |
| ·研究目的和意义 | 第28-30页 |
| ·研究目标和主要研究内容 | 第30-31页 |
| ·研究目标 | 第30页 |
| ·研究主要内容 | 第30-31页 |
| ·研究技术路线 | 第31-32页 |
| 第二章 平榛转录组中与低温胁迫相关的 WRKY 转录因子的筛选及克隆 | 第32-43页 |
| ·试验材料 | 第32-34页 |
| ·植物材料 | 第32-33页 |
| ·生化试剂 | 第33-34页 |
| ·试验方法 | 第34-37页 |
| ·平榛花芽的转录组样品测序流程 | 第34页 |
| ·RNA 提取方法 | 第34-35页 |
| ·平榛转录组 WRKY 转录因子筛选 | 第35-36页 |
| ·WRKY 转录因子的克隆 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-42页 |
| ·RNA 提取结果 | 第37-38页 |
| ·转录组 Unigenes 注释 | 第38-39页 |
| ·低温胁迫下 WRKY 筛选 | 第39-40页 |
| ·平榛 WRKY cDNA 全长的获得 | 第40-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第三章 平榛 WRKY 家族基因的序列分析及功能鉴定 | 第43-70页 |
| ·试验材料 | 第43-44页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-52页 |
| ·RNA 提取 | 第44页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第44-45页 |
| ·cDNA 末端快速扩增 | 第45页 |
| ·凝胶中回收 DNA 片断 | 第45-46页 |
| ·回收片段与 PMD-18 T 载体的连接 | 第46页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第46页 |
| ·细菌中质粒 DNA 的制备 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定、测序 | 第47页 |
| ·WRKY 编码氨基酸的相似性及系统进化发育分析 | 第47页 |
| ·荧光定量 PCR 表达分析 | 第47-48页 |
| ·WRKY-GFP 表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·WRKY 植物表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·农杆菌感受态制备、转化与培养活化 | 第50-51页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第51页 |
| ·PCR 检测 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-68页 |
| ·平榛 WRKY 家族基因的序列分析 | 第52-56页 |
| ·WRKY 编码氨基酸的相似性及系统进化发育分析 | 第56-59页 |
| ·平榛 WRKY 家族基因的核定位预测分析 | 第59-61页 |
| ·平榛 WRKY 家族基因在自然越冬条件下的荧光定量分析 | 第61-62页 |
| ·平榛 WRKY 基因 4℃低温处理不同时间下的荧光定量分析 | 第62-63页 |
| ·平榛 WRKY 基因在盐、旱胁迫下的表达分析 | 第63-65页 |
| ·WRKY 在平榛不同组织中的表达分析 | 第65-66页 |
| ·WRKY-GFP 融合蛋白在洋葱表皮中的表达分析 | 第66页 |
| ·植物表达载体构建及转基因株系的 PCR 鉴定 | 第66-67页 |
| ·低温处理下野生型和转基因拟南芥的表型差异 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-70页 |
| 第四章 平榛 MAPK 基因的克隆及表达分析 | 第70-84页 |
| ·材料与方法 | 第70-71页 |
| ·试验材料 | 第70页 |
| ·主要试剂 | 第70页 |
| ·主要仪器 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-71页 |
| ·结果与分析 | 第71-82页 |
| ·平榛 ChMAPKKK 及 ChMAPKK 全长基因的获得及序列分析 | 第71-75页 |
| ·氨基酸区段的相似性分析及系统进化树分析 | 第75-77页 |
| ·平榛 ChMAPKKK 及 ChMAPKK 在自然越冬条件下的表达分析 | 第77-78页 |
| ·平榛 ChMAPKKK 及 ChMAPKK 基因 4℃处理后的表达分析 | 第78-79页 |
| ·平榛 ChMAPKKK 及 ChMAPKK 基因在旱、盐胁迫后的表达分析 | 第79-80页 |
| ·ChMAPKKK 及 ChMAPKK 基因在平榛不同组织中的表达分析 | 第80页 |
| ·ChMAPKKK 及 ChMAPKK 与 WRKY、DHN 的调控关系分析 | 第80-82页 |
| ·小结 | 第82-84页 |
| 第五章 非生物胁迫下平榛及低温胁迫下转基因拟南芥中生化物质的变化 | 第84-102页 |
| ·试验材料 | 第84页 |
| ·试验方法 | 第84-87页 |
| ·电导率测定方法 | 第84页 |
| ·可溶性蛋白的测定方法 | 第84-85页 |
| ·超氧化物歧化酶的测定方法 | 第85-86页 |
| ·过氧化物酶的测定方法 | 第86页 |
| ·丙二醛的测定方法 | 第86页 |
| ·过氧化氢酶的测定方法 | 第86-87页 |
| ·脯氨酸含量的测定测定方法 | 第87页 |
| ·结果与分析 | 第87-100页 |
| ·平榛在自然越冬条件及非生物胁迫下的生化物质分析 | 第87-96页 |
| ·低温处理后转基因和野生型拟南芥的生化物质分析 | 第96-100页 |
| ·小结 | 第100-102页 |
| 第六章 结论与讨论 | 第102-108页 |
| ·结论 | 第102-103页 |
| ·讨论 | 第103-106页 |
| ·平榛中 WRKY 在自然越冬条件以及人工低温处理下的表达模式 | 第103-104页 |
| ·平榛中 ChMAPKKK 及 ChMAPKK 与 WRKY、DHN 的调控关系 | 第104-105页 |
| ·转基因拟南芥在低温胁迫下的生化指标变化 | 第105-106页 |
| ·本研究的特色与创新之处 | 第106页 |
| ·今后进一步研究的设想 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-117页 |
| 附录 | 第117-129页 |
| 在读期间的学术研究 | 第129-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
