| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 木质纤维素概述 | 第10-11页 |
| 1.1.1 木质纤维素的类型和特点 | 第10页 |
| 1.1.2 木质纤维素原料生产燃料乙醇的重大意义 | 第10-11页 |
| 1.2 国内外燃料乙醇的发展现状 | 第11-12页 |
| 1.3 酵母菌的木糖代谢途径 | 第12-14页 |
| 1.4 酿酒酵母工程菌的研究进展 | 第14-19页 |
| 1.4.1 引入xyl1及xyl2基因 | 第14-16页 |
| 1.4.2 引入XI基因 | 第16-17页 |
| 1.4.3 过表达XK基因 | 第17-18页 |
| 1.4.4 下游途径的改造 | 第18-19页 |
| 1.5 本实验的目的与意义 | 第19页 |
| 1.6 课题资助名称 | 第19-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-55页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-28页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.2 扩增引物 | 第21-22页 |
| 2.1.3 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.4 分子试剂、酶及试剂盒 | 第23-24页 |
| 2.1.5 主要缓冲液及试剂配制 | 第24-27页 |
| 2.1.6 主要实验仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-55页 |
| 2.2.1 xyl1和xyl2基因克隆及序列分析 | 第28-32页 |
| 2.2.2 整合型质粒pAK-xyl1-4及p-AKRX2-2的构建 | 第32-34页 |
| 2.2.3 重组质粒限制性内切酶酶切图谱分析 | 第34-47页 |
| 2.2.4 酿酒酵母重组子的构建 | 第47-50页 |
| 2.2.5 重组子的验证及高拷贝菌株的筛选 | 第50-51页 |
| 2.2.6 重组子蛋白质含量的测定 | 第51页 |
| 2.2.7 重组子酶活与辅酶比的测定 | 第51-53页 |
| 2.2.8 重组子发酵试验 | 第53-55页 |
| 第3章 结果与分析 | 第55-111页 |
| 3.1 xyl1和xyl2基因亚克隆及序列分析 | 第55-67页 |
| 3.1.1 P.stipitis CICC1960基因组DNA的提取 | 第55页 |
| 3.1.2 xyl1及xyl2基因PCR验证 | 第55-56页 |
| 3.1.3 pTSUN-xyl1、pTSUN-xyl2质粒的筛选验证 | 第56-58页 |
| 3.1.4 xyl1及xyl2克隆测序及生物信息学分析 | 第58-67页 |
| 3.2 酵母整合型表达载体pAK-xyl1-4及p-AKRX2-2的构建 | 第67-70页 |
| 3.2.1 骨架质粒胶回收 | 第67-68页 |
| 3.2.2 目的基因胶回收 | 第68-69页 |
| 3.2.3 重组质粒酶切及PCR验证 | 第69-70页 |
| 3.3 重组质粒限制性内切酶酶切图谱分析 | 第70-74页 |
| 3.3.1 pAK-xyl1质粒mapping分析 | 第70-71页 |
| 3.3.2 pAK-xyl1-4质粒mapping分析 | 第71-72页 |
| 3.3.3 p-AKRX质粒mapping分析 | 第72-73页 |
| 3.3.4 p-AKRX2-2质粒mapping分析 | 第73-74页 |
| 3.4 重组质粒转化酿酒酵母 | 第74-84页 |
| 3.4.1 质粒线性化 | 第74-75页 |
| 3.4.2 重组子筛选及验证 | 第75-84页 |
| 3.5 重组子蛋白质含量、酶活测定 | 第84-97页 |
| 3.5.1 蛋白质含量测定 | 第84-87页 |
| 3.5.2 木糖还原酶酶活测定 | 第87-89页 |
| 3.5.3 木糖醇脱氢酶酶活测定 | 第89-91页 |
| 3.5.4 重组子XR/XDH 比例测定 | 第91-97页 |
| 3.6 重组子碳源发酵利用试验结果 | 第97-106页 |
| 3.6.1 葡萄糖、木糖单碳源发酵利用试验结果 | 第97-101页 |
| 3.6.2 重组子木糖、葡萄糖混合碳源发酵试验 | 第101-106页 |
| 3.7 重组子罐体发酵试验 | 第106-111页 |
| 3.7.1 菌体OD和干重关系曲线测定 | 第106-107页 |
| 3.7.2 HPLC检测 | 第107-111页 |
| 第4章 讨论 | 第111-147页 |
| 4.1 目的基因测序结果分析 | 第111-112页 |
| 4.2 限制性内切酶酶切图谱结果分析 | 第112页 |
| 4.3 重组子抗性筛选结果分析 | 第112-113页 |
| 4.4 酶活测定结果分析 | 第113-122页 |
| 4.4.1 XR酶活测定结果分析 | 第113-117页 |
| 4.4.2 XDH酶活测定结果分析 | 第117-119页 |
| 4.4.3 XR/XDH比例测定结果分析 | 第119-122页 |
| 4.5 发酵结果分析 | 第122-147页 |
| 4.5.1 葡萄糖摇瓶发酵结果分析 | 第122-128页 |
| 4.5.2 木糖摇瓶发酵结果分析 | 第128-135页 |
| 4.5.3 双碳源摇瓶发酵结果分析 | 第135-145页 |
| 4.5.4 罐体发酵结果分析 | 第145-147页 |
| 第5章 结论 | 第147-149页 |
| 参考文献 | 第149-158页 |
| 致谢 | 第158-159页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第159-160页 |
