| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第15-31页 |
| 1.1 抗糖尿病药物研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2 西他列汀 | 第17-21页 |
| 1.2.1 西他列汀化学名称及结构 | 第17-18页 |
| 1.2.2 西他列汀药理作用 | 第18页 |
| 1.2.3 西他列汀的合成 | 第18-21页 |
| 1.2.3.1 化学法合成西他列汀 | 第18-20页 |
| 1.2.3.2 生物酶法合成西他列汀 | 第20-21页 |
| 1.3 转氨酶 | 第21-29页 |
| 1.3.1 转氨酶的分类 | 第21-22页 |
| 1.3.1.1 天冬氨酸转氨酶（AspATs）和芳香族转氨酶（AroATs） | 第21页 |
| 1.3.1.2 支链转氨酶（BCATs）和D-转氨酶（D-ATs） | 第21-22页 |
| 1.3.1.3 ω-转氨酶(ω-ATs) | 第22页 |
| 1.3.2 ω-转氨酶对映体识别的分子机制 | 第22-24页 |
| 1.3.3 高选择性（R）-转氨酶的构建 | 第24-25页 |
| 1.3.4 ω-转氨酶催化不对称合成过程的热/动力学研究 | 第25-26页 |
| 1.3.5 ω-转氨酶催化制备手性胺 | 第26-29页 |
| 1.4 本论文的选题依据及研究内容 | 第29-31页 |
| 第二章 转氨酶的筛选及酶学性质的研究 | 第31-44页 |
| 2.1 前言 | 第31-32页 |
| 2.2 材料与方法 | 第32-36页 |
| 2.2.1 菌株 | 第32页 |
| 2.2.2 培养基 | 第32页 |
| 2.2.3 主要试剂与材料 | 第32-33页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第33页 |
| 2.2.5 (R)-转氨酶的筛选 | 第33-35页 |
| 2.2.5.1 重组菌的摇瓶培养 | 第34页 |
| 2.2.5.2 重组转氨酶的SDS-PAGE分析 | 第34页 |
| 2.2.5.3 酶活检测及计算方法 | 第34-35页 |
| 2.2.6 重组转氨酶的酶学性质研究 | 第35-36页 |
| 2.2.6.1 重组转氨酶的分离纯化 | 第35页 |
| 2.2.6.2 重组转氨酶的最适pH及pH稳定性 | 第35页 |
| 2.2.6.3 重组转氨酶的最适温度及温度稳定性 | 第35-36页 |
| 2.2.6.4 金属离子和EDTA对重组转氨酶酶活的影响 | 第36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-43页 |
| 2.3.1 转氨酶的筛选 | 第36-38页 |
| 2.3.1.1 重组转氨酶的SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| 2.3.1.2 重组转氨酶活力的检测 | 第37-38页 |
| 2.3.2 重组转氨酶的分离纯化 | 第38-39页 |
| 2.3.3 重组转氨酶的酶学性质 | 第39-43页 |
| 2.3.3.1 重组转氨酶的最适pH | 第39页 |
| 2.3.3.2 重组转氨酶的pH稳定性 | 第39-40页 |
| 2.3.3.3 重组转氨酶的最适温度 | 第40-41页 |
| 2.3.3.4 重组转氨酶的热稳定性 | 第41-42页 |
| 2.3.3.5 金属离子和EDTA对重组转氨酶活性的影响 | 第42-43页 |
| 2.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 ZJB ATA‐1 发酵产酶条件的研究 | 第44-60页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 材料与方法 | 第44-46页 |
| 3.2.1 菌种 | 第44页 |
| 3.2.2 培养基 | 第44-45页 |
| 3.2.3 培养方法 | 第45页 |
| 3.2.4 发酵培养基的优化 | 第45页 |
| 3.2.5 发酵条件的优化 | 第45-46页 |
| 3.2.6 生物量的测定 | 第46页 |
| 3.2.7 酶活的检测 | 第46页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第46-59页 |
| 3.3.1 重组转氨酶ZJB ATA-1 发酵培养基的优化 | 第46-55页 |
| 3.3.1.1 单因素优化培养基 | 第46-49页 |
| 3.3.1.2 PB实验设计筛选影响产酶的重要因子 | 第49-51页 |
| 3.3.1.3 最陡爬坡实验 | 第51-52页 |
| 3.3.1.4 响应面设计确定培养基组分的浓度 | 第52-55页 |
| 3.3.2 重组转氨酶ZJB ATA-1 产酶条件的优化 | 第55-58页 |
| 3.3.2.1 诱导时机的确定 | 第55-56页 |
| 3.3.2.2 诱导温度的确定 | 第56-57页 |
| 3.3.2.3 诱导剂浓度的确定 | 第57-58页 |
| 3.3.2.4 培养时间的影响 | 第58页 |
| 3.3.3 ZJB ATA-1 发酵产酶的放大 | 第58-59页 |
| 3.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 第四章 重组转氨酶催化生产西他列汀手性中间体的研究 | 第60-69页 |
| 4.1 引言 | 第60-61页 |
| 4.2 材料与方法 | 第61-63页 |
| 4.2.1 菌株 | 第61页 |
| 4.2.2 化学试剂及材料 | 第61页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第61页 |
| 4.2.4 催化剂的制备 | 第61页 |
| 4.2.5 催化剂形式的选择 | 第61页 |
| 4.2.6 转氨酶催化生产西他列汀手性胺 | 第61-62页 |
| 4.2.7 产物的制备 | 第62-63页 |
| 4.2.8 西他列汀磷酸盐的制备 | 第63页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第63-68页 |
| 4.3.1 催化剂形式的选择 | 第63-64页 |
| 4.3.2 不同助溶剂对转氨酶催化反应的影响 | 第64-65页 |
| 4.3.3 DMSO浓度的选择 | 第65-66页 |
| 4.3.4 不同酶量对转氨酶催化反应的影响 | 第66页 |
| 4.3.5 底物浓度对转氨酶催化反应的影响 | 第66-67页 |
| 4.3.6 产物的制备 | 第67-68页 |
| 4.3.7 产品西他列汀的表征 | 第68页 |
| 4.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 第五章 结论与展望 | 第69-71页 |
| 5.1 结论 | 第69-70页 |
| 5.2 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 附录 | 第78-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
