中文摘要 | 第3-5页 |
英文摘要 | 第5-7页 |
1 绪论 | 第15-33页 |
1.1 MADS-box蛋白的研究进展 | 第15-24页 |
1.1.1 MADS-box蛋白命名 | 第15页 |
1.1.2 MADS-box蛋白分类及结构 | 第15-17页 |
1.1.3 MADS-box基因的重复与功能进化 | 第17-18页 |
1.1.4 MADS-box基因调控花发育的分子机制 | 第18-20页 |
1.1.5 MADS-box基因在植物中的其它功能 | 第20-24页 |
1.2 番茄MADS-box蛋白的研究进展 | 第24-28页 |
1.2.1 MADS-box基因对番茄花器官形成的影响 | 第25页 |
1.2.2 MADS-box基因对番茄花序发育的影响 | 第25-26页 |
1.2.3 MADS-box基因调控了番茄果实的成熟 | 第26-27页 |
1.2.4 MADS-box基因调控了番茄花柄离区的形成 | 第27-28页 |
1.3 课题的提出及研究意义 | 第28页 |
1.4 研究内容、技术路线及创新点 | 第28-33页 |
1.4.1 研究内容 | 第28-30页 |
1.4.2 技术路线 | 第30-31页 |
1.4.3 创新点 | 第31-33页 |
2 番茄MADS-box蛋白家族全基因组生物信息学和表达模式分析 | 第33-53页 |
2.1 引言 | 第33页 |
2.2 材料、试剂与仪器 | 第33-34页 |
2.2.1 材料 | 第33页 |
2.2.2 试剂与药品 | 第33页 |
2.2.3 仪器与设备 | 第33-34页 |
2.3 实验方法 | 第34-39页 |
2.3.1 番茄材料的收集 | 第34页 |
2.3.2 番茄MAD-box基因的查找 | 第34-35页 |
2.3.3 番茄MAD-box基因的核苷酸及蛋白序列生物信息学分析 | 第35页 |
2.3.4 总RNA的提取 | 第35-36页 |
2.3.5 cDNA的合成 | 第36页 |
2.3.6 番茄花器官特征基因的引物设计及评估 | 第36-38页 |
2.3.7 番茄花器官特征基因的组织表达模式分析 | 第38-39页 |
2.3.8 MIKC型MADS-box基因表达谱分析 | 第39页 |
2.4 结果与分析 | 第39-50页 |
2.4.1 番茄MAD-box基因的查找和命名 | 第39页 |
2.4.2 番茄MADS-box基因分子特征分析 | 第39-44页 |
2.4.3 番茄MADS-box蛋白的分类和进化分析 | 第44-46页 |
2.4.4 番茄MIKC型MADS-box基因表达谱分析 | 第46-47页 |
2.4.5 番茄花器官特征基因的筛选与表达模式分析 | 第47-50页 |
2.5 讨论 | 第50-51页 |
2.6 本章小结 | 第51-53页 |
3 番茄SlGLO1基因的功能研究 | 第53-87页 |
3.1 引言 | 第53-54页 |
3.2 材料、试剂与仪器 | 第54-59页 |
3.2.1 材料 | 第54-55页 |
3.2.2 仪器与设备 | 第55-56页 |
3.2.3 试剂与培养基 | 第56-59页 |
3.3 实验方法 | 第59-72页 |
3.3.1 基因组DNA的提取 | 第59-60页 |
3.3.2 总RNA的提取 | 第60页 |
3.3.3 cDNA的合成 | 第60页 |
3.3.4 SlGLO1基因的生物信息学分析 | 第60页 |
3.3.5 SlGLO1基因的表达模式研究 | 第60-62页 |
3.3.6 SlGLO1沉默载体的构建 | 第62-67页 |
3.3.7 pBIN19-SlGLO1质粒转化农杆菌 | 第67-68页 |
3.3.8 SlGLO1沉默转基因番茄的培育 | 第68-69页 |
3.3.9 SlGLO1沉默阳性转基因番茄株系的筛选 | 第69页 |
3.3.10 扫描电镜及显微镜分析 | 第69-70页 |
3.3.11 花瓣和雄蕊叶绿素的提取和定量 | 第70页 |
3.3.12 花瓣长度统计 | 第70页 |
3.3.13 花粉收集、处理和萌发 | 第70页 |
3.3.14 杂交试验 | 第70页 |
3.3.15 在野生型番茄中沉默SlGLO1对叶绿素合成、花器官特征以及花粉特异基因的影响 | 第70-72页 |
3.4 结果与分析 | 第72-83页 |
3.4.1 SlGLO1基因的克隆与分子特征 | 第72-73页 |
3.4.2 SlGLO1基因在野生型番茄中的表达模式分析 | 第73页 |
3.4.3 SlGLO1转基因番茄苗系的PCR阳性筛选 | 第73-74页 |
3.4.4 番茄基因SlGLO1的沉默产生了绿色较小的花瓣 | 第74-76页 |
3.4.5 SlGLO1的沉默产生了绿色畸形的雄蕊 | 第76-77页 |
3.4.6 转基因花瓣和雄蕊的叶绿素含量升高、叶绿素合成基因上调 | 第77-79页 |
3.4.7 转基因株系中番茄花器官特征基因转录分析 | 第79-80页 |
3.4.8 SlGLO1沉默的番茄植株是雄性不育的 | 第80-82页 |
3.4.9 SlGLO1基因启动子顺式作用元件分析 | 第82-83页 |
3.5 讨论 | 第83-86页 |
3.6 本章小结 | 第86-87页 |
4 番茄SlMBP11基因的功能研究 | 第87-129页 |
4.1 引言 | 第87-88页 |
4.2 材料、试剂与仪器 | 第88页 |
4.2.1 材料 | 第88页 |
4.2.2 仪器与设备 | 第88页 |
4.2.3 试剂与培养基 | 第88页 |
4.3 实验方法 | 第88-100页 |
4.3.1 SlMBP11基因的生物信息学分析 | 第88页 |
4.3.2 SlMBP11基因的表达模式研究 | 第88-90页 |
4.3.3 SlMBP11沉默载体的构建 | 第90-94页 |
4.3.4 SlMBP11超表达载体的构建 | 第94-95页 |
4.3.5 pBIN19-SlMBP11i及pBI121-SlMBP11oe质粒转化农杆菌 | 第95页 |
4.3.6 SlMBP11沉默及超表达转基因番茄的培育 | 第95页 |
4.3.7 SlMBP11沉默和超表达阳性转基因番茄株系的PCR筛选 | 第95-96页 |
4.3.8 SlMBP11在沉默及超表转基因株系中的表达检测 | 第96页 |
4.3.9 SlMBP11基因的表达谱分析 | 第96页 |
4.3.10 番茄植株形态参数的测量 | 第96页 |
4.3.11 扫描电镜分析 | 第96页 |
4.3.12 茎的解剖和细胞学分析 | 第96-97页 |
4.3.13 叶片总叶绿素含量的测定 | 第97页 |
4.3.14 实时定量PCR分析转基因对赤霉素合成、响应和细胞伸长基因、番茄独脚金内酯合成和侧芽发育相关基因、乙烯合成和响应基因以及光合作用相关基因的影响 | 第97-98页 |
4.3.15 野生型番茄非生物胁迫处理 | 第98-99页 |
4.3.16 转基因番茄盐胁迫实验 | 第99页 |
4.3.17 相对含水量的测定 | 第99页 |
4.3.18 相对电导率的测定 | 第99页 |
4.3.19 丙二醛含量的测定 | 第99页 |
4.3.20 实时定量PCR分析盐胁迫对叶绿素合成、光合作用以及胁迫相关基因的影响 | 第99-100页 |
4.4 结果与分析 | 第100-122页 |
4.4.1 SlMBP11基因的克隆和分子特征 | 第100-102页 |
4.4.2 SlMBP11基因在野生型番茄中的表达模式 | 第102-103页 |
4.4.3 SlMBP11转基因番茄苗系的培育与筛选 | 第103-104页 |
4.4.4 转基因番茄苗系的SlMBP11基因表达水平检测 | 第104页 |
4.4.5 SlMBP11基因的超表达改变了番茄幼苗的植株形态 | 第104-106页 |
4.4.6 超表达株系茎的细胞变小 | 第106-107页 |
4.4.7 赤霉素合成、响应和细胞伸长相关基因的转录分析 | 第107-108页 |
4.4.8 SlMBP11的超表达导致番茄植株侧芽增加 | 第108-110页 |
4.4.9 番茄独脚金内酯合成和侧芽发育相关基因的表达分析 | 第110-111页 |
4.4.10 SlMBP11的超表达使番茄植株的花和果实的形态发生变化 | 第111-113页 |
4.4.11 SlMBP11的超表达推迟了番茄花被器官的衰老 | 第113-115页 |
4.4.12 SlMBP11在多种胁迫处理下的表达模式 | 第115-116页 |
4.4.13 SlMBP11的沉默增加了番茄幼苗生长对盐胁迫的敏感性 | 第116-117页 |
4.4.14 SlMBP11基因的表达变化影响了番茄的抗盐性 | 第117-118页 |
4.4.15 盐胁迫条件下SlMBP11转基因植株的生理变化 | 第118-119页 |
4.4.16 盐胁迫处理下野生型和转基因株系中叶绿素合成和光合作用相关基因的相对m RNA转录水平 | 第119-121页 |
4.4.17 盐胁迫处理下野生型和转基因株系中胁迫相关基因的表达分析 | 第121-122页 |
4.5 讨论 | 第122-127页 |
4.5.1 SlMBP11表达水平的增加对植株形态的影响 | 第123-124页 |
4.5.2 SlMBP11基因的超表达影响了番茄生殖器官的形态和发育 | 第124-125页 |
4.5.3 番茄SlMBP11基因参与了植物非生物胁迫响应,在番茄耐盐性上发挥着正调控作用 | 第125-127页 |
4.6 本章小结 | 第127-129页 |
5 结论与展望 | 第129-133页 |
5.1 主要结论 | 第129-130页 |
5.2 展望 | 第130-133页 |
致谢 | 第133-135页 |
参考文献 | 第135-157页 |
附录 | 第157页 |