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两个番茄MIKC~C型MADS-box基因的功能研究

中文摘要第3-5页
英文摘要第5-7页
1 绪论第15-33页
    1.1 MADS-box蛋白的研究进展第15-24页
        1.1.1 MADS-box蛋白命名第15页
        1.1.2 MADS-box蛋白分类及结构第15-17页
        1.1.3 MADS-box基因的重复与功能进化第17-18页
        1.1.4 MADS-box基因调控花发育的分子机制第18-20页
        1.1.5 MADS-box基因在植物中的其它功能第20-24页
    1.2 番茄MADS-box蛋白的研究进展第24-28页
        1.2.1 MADS-box基因对番茄花器官形成的影响第25页
        1.2.2 MADS-box基因对番茄花序发育的影响第25-26页
        1.2.3 MADS-box基因调控了番茄果实的成熟第26-27页
        1.2.4 MADS-box基因调控了番茄花柄离区的形成第27-28页
    1.3 课题的提出及研究意义第28页
    1.4 研究内容、技术路线及创新点第28-33页
        1.4.1 研究内容第28-30页
        1.4.2 技术路线第30-31页
        1.4.3 创新点第31-33页
2 番茄MADS-box蛋白家族全基因组生物信息学和表达模式分析第33-53页
    2.1 引言第33页
    2.2 材料、试剂与仪器第33-34页
        2.2.1 材料第33页
        2.2.2 试剂与药品第33页
        2.2.3 仪器与设备第33-34页
    2.3 实验方法第34-39页
        2.3.1 番茄材料的收集第34页
        2.3.2 番茄MAD-box基因的查找第34-35页
        2.3.3 番茄MAD-box基因的核苷酸及蛋白序列生物信息学分析第35页
        2.3.4 总RNA的提取第35-36页
        2.3.5 cDNA的合成第36页
        2.3.6 番茄花器官特征基因的引物设计及评估第36-38页
        2.3.7 番茄花器官特征基因的组织表达模式分析第38-39页
        2.3.8 MIKC型MADS-box基因表达谱分析第39页
    2.4 结果与分析第39-50页
        2.4.1 番茄MAD-box基因的查找和命名第39页
        2.4.2 番茄MADS-box基因分子特征分析第39-44页
        2.4.3 番茄MADS-box蛋白的分类和进化分析第44-46页
        2.4.4 番茄MIKC型MADS-box基因表达谱分析第46-47页
        2.4.5 番茄花器官特征基因的筛选与表达模式分析第47-50页
    2.5 讨论第50-51页
    2.6 本章小结第51-53页
3 番茄SlGLO1基因的功能研究第53-87页
    3.1 引言第53-54页
    3.2 材料、试剂与仪器第54-59页
        3.2.1 材料第54-55页
        3.2.2 仪器与设备第55-56页
        3.2.3 试剂与培养基第56-59页
    3.3 实验方法第59-72页
        3.3.1 基因组DNA的提取第59-60页
        3.3.2 总RNA的提取第60页
        3.3.3 cDNA的合成第60页
        3.3.4 SlGLO1基因的生物信息学分析第60页
        3.3.5 SlGLO1基因的表达模式研究第60-62页
        3.3.6 SlGLO1沉默载体的构建第62-67页
        3.3.7 pBIN19-SlGLO1质粒转化农杆菌第67-68页
        3.3.8 SlGLO1沉默转基因番茄的培育第68-69页
        3.3.9 SlGLO1沉默阳性转基因番茄株系的筛选第69页
        3.3.10 扫描电镜及显微镜分析第69-70页
        3.3.11 花瓣和雄蕊叶绿素的提取和定量第70页
        3.3.12 花瓣长度统计第70页
        3.3.13 花粉收集、处理和萌发第70页
        3.3.14 杂交试验第70页
        3.3.15 在野生型番茄中沉默SlGLO1对叶绿素合成、花器官特征以及花粉特异基因的影响第70-72页
    3.4 结果与分析第72-83页
        3.4.1 SlGLO1基因的克隆与分子特征第72-73页
        3.4.2 SlGLO1基因在野生型番茄中的表达模式分析第73页
        3.4.3 SlGLO1转基因番茄苗系的PCR阳性筛选第73-74页
        3.4.4 番茄基因SlGLO1的沉默产生了绿色较小的花瓣第74-76页
        3.4.5 SlGLO1的沉默产生了绿色畸形的雄蕊第76-77页
        3.4.6 转基因花瓣和雄蕊的叶绿素含量升高、叶绿素合成基因上调第77-79页
        3.4.7 转基因株系中番茄花器官特征基因转录分析第79-80页
        3.4.8 SlGLO1沉默的番茄植株是雄性不育的第80-82页
        3.4.9 SlGLO1基因启动子顺式作用元件分析第82-83页
    3.5 讨论第83-86页
    3.6 本章小结第86-87页
4 番茄SlMBP11基因的功能研究第87-129页
    4.1 引言第87-88页
    4.2 材料、试剂与仪器第88页
        4.2.1 材料第88页
        4.2.2 仪器与设备第88页
        4.2.3 试剂与培养基第88页
    4.3 实验方法第88-100页
        4.3.1 SlMBP11基因的生物信息学分析第88页
        4.3.2 SlMBP11基因的表达模式研究第88-90页
        4.3.3 SlMBP11沉默载体的构建第90-94页
        4.3.4 SlMBP11超表达载体的构建第94-95页
        4.3.5 pBIN19-SlMBP11i及pBI121-SlMBP11oe质粒转化农杆菌第95页
        4.3.6 SlMBP11沉默及超表达转基因番茄的培育第95页
        4.3.7 SlMBP11沉默和超表达阳性转基因番茄株系的PCR筛选第95-96页
        4.3.8 SlMBP11在沉默及超表转基因株系中的表达检测第96页
        4.3.9 SlMBP11基因的表达谱分析第96页
        4.3.10 番茄植株形态参数的测量第96页
        4.3.11 扫描电镜分析第96页
        4.3.12 茎的解剖和细胞学分析第96-97页
        4.3.13 叶片总叶绿素含量的测定第97页
        4.3.14 实时定量PCR分析转基因对赤霉素合成、响应和细胞伸长基因、番茄独脚金内酯合成和侧芽发育相关基因、乙烯合成和响应基因以及光合作用相关基因的影响第97-98页
        4.3.15 野生型番茄非生物胁迫处理第98-99页
        4.3.16 转基因番茄盐胁迫实验第99页
        4.3.17 相对含水量的测定第99页
        4.3.18 相对电导率的测定第99页
        4.3.19 丙二醛含量的测定第99页
        4.3.20 实时定量PCR分析盐胁迫对叶绿素合成、光合作用以及胁迫相关基因的影响第99-100页
    4.4 结果与分析第100-122页
        4.4.1 SlMBP11基因的克隆和分子特征第100-102页
        4.4.2 SlMBP11基因在野生型番茄中的表达模式第102-103页
        4.4.3 SlMBP11转基因番茄苗系的培育与筛选第103-104页
        4.4.4 转基因番茄苗系的SlMBP11基因表达水平检测第104页
        4.4.5 SlMBP11基因的超表达改变了番茄幼苗的植株形态第104-106页
        4.4.6 超表达株系茎的细胞变小第106-107页
        4.4.7 赤霉素合成、响应和细胞伸长相关基因的转录分析第107-108页
        4.4.8 SlMBP11的超表达导致番茄植株侧芽增加第108-110页
        4.4.9 番茄独脚金内酯合成和侧芽发育相关基因的表达分析第110-111页
        4.4.10 SlMBP11的超表达使番茄植株的花和果实的形态发生变化第111-113页
        4.4.11 SlMBP11的超表达推迟了番茄花被器官的衰老第113-115页
        4.4.12 SlMBP11在多种胁迫处理下的表达模式第115-116页
        4.4.13 SlMBP11的沉默增加了番茄幼苗生长对盐胁迫的敏感性第116-117页
        4.4.14 SlMBP11基因的表达变化影响了番茄的抗盐性第117-118页
        4.4.15 盐胁迫条件下SlMBP11转基因植株的生理变化第118-119页
        4.4.16 盐胁迫处理下野生型和转基因株系中叶绿素合成和光合作用相关基因的相对m RNA转录水平第119-121页
        4.4.17 盐胁迫处理下野生型和转基因株系中胁迫相关基因的表达分析第121-122页
    4.5 讨论第122-127页
        4.5.1 SlMBP11表达水平的增加对植株形态的影响第123-124页
        4.5.2 SlMBP11基因的超表达影响了番茄生殖器官的形态和发育第124-125页
        4.5.3 番茄SlMBP11基因参与了植物非生物胁迫响应,在番茄耐盐性上发挥着正调控作用第125-127页
    4.6 本章小结第127-129页
5 结论与展望第129-133页
    5.1 主要结论第129-130页
    5.2 展望第130-133页
致谢第133-135页
参考文献第135-157页
附录第157页

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