| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩写表 | 第9-15页 |
| 1 前言 | 第15-29页 |
| 1.1 干旱胁迫与植物的生理生化基础 | 第15-18页 |
| 1.1.1 干旱胁迫与植物抗氧化系统 | 第15-16页 |
| 1.1.2 干旱胁迫与植物渗透调节物质 | 第16-17页 |
| 1.1.3 干旱胁迫与植物细胞膜系统 | 第17页 |
| 1.1.4 干旱胁迫与植物内源激素 | 第17-18页 |
| 1.2 干旱胁迫与植物基因 | 第18-22页 |
| 1.2.1 干旱胁迫与植物基因的调控 | 第18-19页 |
| 1.2.2 植物干旱响应基因的挖掘 | 第19-20页 |
| 1.2.3 植物抗旱基因的功能研究 | 第20-22页 |
| 1.3 植物P5CS基因研究进展 | 第22-25页 |
| 1.3.1 植物P5CS基因的克隆与表达特性研究 | 第23-24页 |
| 1.3.2 植物P5CS基因在抗逆基因工程中的应用 | 第24-25页 |
| 1.4 甘蔗转基因研究进展 | 第25-27页 |
| 1.4.1 甘蔗遗传转化方法 | 第25-26页 |
| 1.4.2 甘蔗抗逆转基因研究 | 第26-27页 |
| 1.5 本研究的立论依据、研究目的及意义 | 第27-28页 |
| 1.6 本研究的技术路线 | 第28-29页 |
| 2 SoP5CS基因的克隆及序列分析 | 第29-38页 |
| 2.1 材料 | 第29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第29页 |
| 2.1.2 菌种及载体 | 第29页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-30页 |
| 2.2.1 甘蔗幼苗叶片总RNA的提取及检测 | 第29页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| 2.2.3 引物设计和PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.4 目的条带的胶回收纯化 | 第30页 |
| 2.2.5 SoP5CS片段的连接及测序验证 | 第30页 |
| 2.2.6 生物信息学分析 | 第30页 |
| 2.3 结果分析 | 第30-36页 |
| 2.3.1 提取的总RNA质量检测 | 第30-31页 |
| 2.3.2 SoP5CS基因的扩增 | 第31-32页 |
| 2.3.3 SoP5CS基因的生物信息学相关分析 | 第32-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 3 SoP5CS基因表达量分析 | 第38-43页 |
| 3.1 材料 | 第38页 |
| 3.1.1 植物材料及处理 | 第38页 |
| 3.1.2 实验主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第38页 |
| 3.2 实验主要方法 | 第38-39页 |
| 3.2.1 RNA的提取及检测 | 第38页 |
| 3.2.2 基因组DNA的去除及cDNA的合成 | 第38-39页 |
| 3.2.3 SoP5CS基因荧光定量PCR引物的设计 | 第39页 |
| 3.2.4 荧光定量PCR | 第39页 |
| 3.3 结果分析 | 第39-41页 |
| 3.3.1 RNA和cDNA质量的检测 | 第39页 |
| 3.3.2 SoP5CS的组织表达特性 | 第39-40页 |
| 3.3.3 SoP5CS在不同处理下的表达特性 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 3.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 4 SoP5CS的原核表达、蛋白纯化及单克隆抗体制备 | 第43-55页 |
| 4.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.1 载体及菌株 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-47页 |
| 4.2.1 pET-30a载体质粒的提取 | 第43页 |
| 4.2.2 目的基因与载体的双酶切 | 第43-44页 |
| 4.2.3 目的基因片段与原核表达载体的连接及转化 | 第44页 |
| 4.2.4 重组质粒pET30a-SoP5CS的提取及双酶切验证 | 第44-45页 |
| 4.2.5 重组质粒pET30a-SoP5CS转化BL21 | 第45页 |
| 4.2.6 融合蛋白的诱导表达 | 第45页 |
| 4.2.7 SDS-PAGE电泳 | 第45-46页 |
| 4.2.8 原核表达的SoP5CS蛋白的纯化 | 第46页 |
| 4.2.9 单克隆抗体的制备及鉴定 | 第46-47页 |
| 4.3 结果分析 | 第47-53页 |
| 4.3.1 原核表达载体的构建及验证 | 第47-48页 |
| 4.3.2 原核表达 | 第48-49页 |
| 4.3.3 原核表达蛋白的纯化 | 第49-51页 |
| 4.3.4 单克隆抗体的制备 | 第51-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-54页 |
| 4.5 小结 | 第54-55页 |
| 5 甘蔗过量表达SoP5CS基因的研究 | 第55-70页 |
| 5.1 材料 | 第55-56页 |
| 5.1.1 甘蔗材料 | 第55页 |
| 5.1.2 农杆菌及植物表达载体 | 第55页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第55页 |
| 5.1.4 培养基 | 第55-56页 |
| 5.1.5 主要的仪器设备 | 第56页 |
| 5.2 方法 | 第56-59页 |
| 5.2.1 植物表达载体引物的设计 | 第56页 |
| 5.2.2 SoP5CS基因ORF的扩增及回收 | 第56页 |
| 5.2.3 PUBTB质粒的提取 | 第56页 |
| 5.2.4 目的基因片段和载体质粒的双酶切及纯化 | 第56-57页 |
| 5.2.5 SoP5CS与植物表达载体的连接及转化 | 第57页 |
| 5.2.6 重组质粒的提取及酶切验证 | 第57页 |
| 5.2.7 重组质粒转化EHA105农杆菌 | 第57页 |
| 5.2.8 甘蔗组培材料的抗性筛选 | 第57-58页 |
| 5.2.9 甘蔗的遗传转化 | 第58-59页 |
| 5.2.10 转基因甘蔗基因组DNA的提取 | 第59页 |
| 5.2.11 转基因甘蔗的PCR检测 | 第59页 |
| 5.2.12 转基因甘蔗的抗旱研究 | 第59页 |
| 5.3 结果分析 | 第59-67页 |
| 5.3.1 植物表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 5.3.2 PPT的抗性筛选 | 第60-62页 |
| 5.3.3 转基因甘蔗的获得 | 第62-63页 |
| 5.3.4 转基因甘蔗的PCR检测 | 第63-64页 |
| 5.3.5 转基因甘蔗的抗旱性鉴定 | 第64-67页 |
| 5.4 讨论 | 第67-69页 |
| 5.5 小结 | 第69-70页 |
| 6 SoP5CS基因转化烟草的研究 | 第70-85页 |
| 6.1 材料 | 第70页 |
| 6.1.1 烟草材料 | 第70页 |
| 6.1.2 菌种及载体 | 第70页 |
| 6.1.3 主要试剂 | 第70页 |
| 6.1.4 培养基 | 第70页 |
| 6.1.5 主要仪器设备 | 第70页 |
| 6.2 方法 | 第70-73页 |
| 6.2.1 烟草无菌苗的培养及烟草的遗传转化 | 第70-71页 |
| 6.2.2 转基因烟草DNA的提取 | 第71页 |
| 6.2.3 转基因烟草的PCR检测 | 第71页 |
| 6.2.4 转基因烟草的基因拷贝数测定 | 第71-72页 |
| 6.2.5 转基因烟草的抗旱性检测 | 第72-73页 |
| 6.3 结果与分析 | 第73-82页 |
| 6.3.1 转基因烟草的获得 | 第73-74页 |
| 6.3.2 转基因烟草的检测 | 第74-75页 |
| 6.3.3 转基因烟草的基因拷贝数测定 | 第75-77页 |
| 6.3.4 转基因烟草的抗旱性检测 | 第77-82页 |
| 6.4 讨论 | 第82-84页 |
| 6.5 小结 | 第84-85页 |
| 7 结论 | 第85-87页 |
| 7.1 全文结论 | 第85-86页 |
| 7.2 论文创新点 | 第86页 |
| 7.3 展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-110页 |
| 附录 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第112页 |
