| 中文摘要 | 第10-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第17-54页 |
| 1 流感的流行史及流行动态 | 第18-24页 |
| 1.1 人流感的流行 | 第18-19页 |
| 1.2 禽流感的流行 | 第19-24页 |
| 2 流感病毒结构及其致病特点 | 第24-30页 |
| 2.1 HA的结构对致病力的影响 | 第26-27页 |
| 2.2 NA结构对致病力的影响 | 第27-29页 |
| 2.3 禽流感病毒致病性与病毒的组织趋向性 | 第29-30页 |
| 3 流行病学、生态学及其公共卫生学意义 | 第30-38页 |
| 3.1 流行病学及分子流行病学的概念 | 第30-31页 |
| 3.2 流感病毒在流行病学上的特点 | 第31页 |
| 3.3 流感病毒生态学特点 | 第31-32页 |
| 3.4 流感病毒的公共卫生学意义 | 第32-36页 |
| 3.4.1 禽流感病毒的公共卫生学意义 | 第33-34页 |
| 3.4.2 猪流感病毒的公共卫生学意义 | 第34-36页 |
| 3.5 流行因素分析 | 第36-38页 |
| 4 流感的发病机制 | 第38-41页 |
| 4.1 流感病毒变异的机理 | 第38-39页 |
| 4.1.1 抗原性漂移 | 第38-39页 |
| 4.1.2 抗原性转变 | 第39页 |
| 4.2 流感病毒诱导细胞凋亡 | 第39-41页 |
| 5 禽流感的临床症状及病理变化 | 第41-43页 |
| 5.1 临床症状 | 第41-42页 |
| 5.2 病理变化 | 第42-43页 |
| 5.2.1 病理剖检变化 | 第42-43页 |
| 5.2.2 病理组织学变化 | 第43页 |
| 6 诊断 | 第43-46页 |
| 6.1 病原分离 | 第43页 |
| 6.2 血清学检查 | 第43-45页 |
| 6.2.1 琼脂扩散试验 | 第43-44页 |
| 6.2.2 血凝和血凝抑制试验 | 第44-45页 |
| 6.2.3 ELISA技术 | 第45页 |
| 6.3 分子诊断技术 | 第45-46页 |
| 6.3.1 RT-PCR分子诊断技术 | 第45页 |
| 6.3.2 核酸探针技术 | 第45页 |
| 6.3.3 基因芯片技术 | 第45-46页 |
| 7 流感的防治 | 第46-54页 |
| 7.1 禽流感的免疫预防 | 第46-50页 |
| 7.1.1 国外使用灭活疫苗的状况 | 第46-47页 |
| 7.1.2 我国使用灭活疫苗的状况 | 第47-48页 |
| 7.1.3 新型流感疫苗的发展 | 第48-50页 |
| 7.2 防治药物 | 第50-51页 |
| 7.2.1 金刚烷胺(Amantadine)和甲基金刚烷胺(Rimantadine) | 第50页 |
| 7.2.2 病毒唑(Virazole) | 第50页 |
| 7.2.3 神经氨酸酶抑制物(Neuramindase inhibitors) | 第50-51页 |
| 7.3 防治禽流感应有的对策 | 第51-54页 |
| 7.3.1 改变传统的思维模式 | 第51页 |
| 7.3.2 改变传统的养殖方式 | 第51页 |
| 7.3.3 加强对候鸟的防控 | 第51-52页 |
| 7.3.4 长期的监测及预警预报体系 | 第52页 |
| 7.3.5 主动的疫情报告及保障体系建立的必要性 | 第52-54页 |
| 第2章 H5N1亚型禽流感病毒分离株致病力的生物学特性研究 | 第54-78页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第54-56页 |
| 2 材料和方法 | 第56-61页 |
| 2.1 材料 | 第56-57页 |
| 2.1.1 SPF鸡胚及试验动物 | 第56页 |
| 2.1.2 抗原与抗体 | 第56页 |
| 2.1.3 酶与试剂 | 第56页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第56-57页 |
| 2.1.5 病毒及细胞 | 第57页 |
| 2.1.6 引物设计与合成 | 第57页 |
| 2.2 方法 | 第57-61页 |
| 2.2.1 血清学鉴定 | 第57页 |
| 2.2.2 分离病毒的有限稀释克隆纯化 | 第57页 |
| 2.2.3 病毒增殖 | 第57页 |
| 2.2.4 致病性试验 | 第57-58页 |
| 2.2.5 TCID_(50)测定 | 第58-59页 |
| 2.2.6 组织病理学观察 | 第59页 |
| 2.2.7 病毒粒子的形态学 | 第59页 |
| 2.2.8 细胞凋亡的形态学 | 第59-60页 |
| 2.2.9 细胞凋亡的生化特征观察 | 第60页 |
| 2.2.10 HA基因的克隆及HA蛋白裂解位点分析 | 第60-61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-73页 |
| 3.1 血清学鉴定 | 第61页 |
| 3.2 分离病毒的有限稀释克隆纯化 | 第61页 |
| 3.3 病毒感染力 | 第61-62页 |
| 3.3.1 EID_(50)测定 | 第61页 |
| 3.3.2 IVPI测定 | 第61-62页 |
| 3.3.3 ICPI测定 | 第62页 |
| 3.3.4 TCID_(50)测定结果 | 第62页 |
| 3.4 动物致病力试验结果 | 第62-63页 |
| 3.4.1 对鸡致病力试验 | 第62-63页 |
| 3.4.2 对猪致病力 | 第63页 |
| 3.5 病毒粒子的形态学观察 | 第63-64页 |
| 3.6 发病鸡组织病理学观察 | 第64-67页 |
| 3.7 DNA断裂的原位末端标记结果 | 第67页 |
| 3.8 细胞凋亡电镜下形态学观察 | 第67-68页 |
| 3.9 DNA片段化(DNA ladder)分析 | 第68-70页 |
| 3.10 HA基因蛋白酶切割位点氨基酸序列分析 | 第70-73页 |
| 3.10.1 RT-PCR扩增结果 | 第70-71页 |
| 3.10.2 HA基因的克隆、鉴定及测序 | 第71-72页 |
| 3.10.3 HA基因裂解位点氨基酸序列 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-77页 |
| 4.1 整体水平的致病性研究 | 第73-74页 |
| 4.2 H5N1 AIV对细胞致病特点的研究 | 第74-75页 |
| 4.3 H5N1亚型AIV的分子致病机理 | 第75-77页 |
| 5 小结 | 第77-78页 |
| 第3章 H5N1亚型禽流感病毒HA、NA基因的克隆及序列分析 | 第78-132页 |
| 1 研究目的和意义 | 第78-80页 |
| 2 材料和方法 | 第80-86页 |
| 2.1 材料 | 第80-82页 |
| 2.1.1 病毒株 | 第80页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第80页 |
| 2.1.3 酶及主要试剂 | 第80-81页 |
| 2.1.4 质粒抽提相关溶液 | 第81页 |
| 2.1.5 LB培养基 | 第81-82页 |
| 2.2 方法 | 第82-86页 |
| 2.2.1 病毒的增殖 | 第82页 |
| 2.2.2 病毒RNA的提取 | 第82页 |
| 2.2.3 HA、NA基因的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第82-83页 |
| 2.2.4 HA、NA全基因的cDNA的克隆 | 第83-84页 |
| 2.2.5 阳性重组质粒的筛选与鉴定 | 第84页 |
| 2.2.6 核苷酸序列测定及分析 | 第84-86页 |
| 3 结果与分析 | 第86-126页 |
| 3.1 HA、NA基因RT-PCR产物的扩增 | 第86-87页 |
| 3.2 HA、NA重组质粒PCR扩增产物的克隆与鉴定 | 第87-88页 |
| 3.2.1 HA基因cDNA的克隆与鉴定 | 第87-88页 |
| 3.2.2 NA基因cDNA的克隆与鉴定 | 第88页 |
| 3.3 HA、NA基因核苷酸序列测定及分析 | 第88-126页 |
| 3.3.1 HA基因核苷酸序列测定及分析 | 第88-109页 |
| 3.3.2 NA基因核苷酸序列测定及分析 | 第109-126页 |
| 4 讨论 | 第126-130页 |
| 4.1 核苷酸序列测定及分析 | 第126页 |
| 4.2 HA基因的变异特点 | 第126-127页 |
| 4.3 NA基因的变异特点 | 第127-128页 |
| 4.4 HA基因同源性及分子进化分析 | 第128-129页 |
| 4.5 NA基因同源性及分子进化分析 | 第129-130页 |
| 5 小结 | 第130-132页 |
| 第4章 H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组伪狂犬病毒重组活载体疫苗毒株构建的研究 | 第132-157页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第132-134页 |
| 2 材料与方法 | 第134-145页 |
| 2.1 材料 | 第134-138页 |
| 2.1.1 毒株与细胞 | 第134页 |
| 2.1.2 菌种与质粒 | 第134页 |
| 2.1.3 主要药品及试剂 | 第134页 |
| 2.1.4 单克隆抗体 | 第134-136页 |
| 2.1.5 主要培养基 | 第136-137页 |
| 2.1.6 血清 | 第137页 |
| 2.1.7 缓冲液 | 第137-138页 |
| 2.1.8 其它缓冲液 | 第138页 |
| 2.1.9 试验鼠 | 第138页 |
| 2.2 方法 | 第138-145页 |
| 2.2.1 病毒的增殖 | 第138页 |
| 2.2.2 病毒基因组的提取 | 第138-139页 |
| 2.2.3 AIV-HA基因的克隆 | 第139页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第139页 |
| 2.2.5 HA基因与pCDNA3.1载体连接 | 第139-140页 |
| 2.2.6 连接产物的转化 | 第140页 |
| 2.2.7 质粒的小量制备(碱裂解法) | 第140页 |
| 2.2.8 重组质粒pCD-HA的鉴定 | 第140页 |
| 2.2.9 重组转移质粒pIECMV-HA的构建及鉴定 | 第140页 |
| 2.2.10 质粒的大量制备(碱裂解法) | 第140-141页 |
| 2.2.11 共转染 | 第141页 |
| 2.2.12 空斑筛选纯化 | 第141页 |
| 2.2.13 PCR检测外源基因在重组病毒中的整合 | 第141-142页 |
| 2.2.14 重组病毒TCID_(50)的测定 | 第142页 |
| 2.2.15 SDS-PAGE电泳 | 第142页 |
| 2.2.16 Western blot | 第142-143页 |
| 2.2.17 间接免疫荧光法检测 | 第143页 |
| 2.2.18 小鼠分组及免疫 | 第143-144页 |
| 2.2.19 间接ELISA抗体检测 | 第144-145页 |
| 3 结果与分析 | 第145-153页 |
| 3.1 H5N1 AIV HA基因重组伪狂犬病毒TK~-／gE~-／gI~-／HA~+的构建 | 第145-147页 |
| 3.1.1 H5N1亚型禽流感病毒HA基因的克隆 | 第145页 |
| 3.1.2 重组质粒pCD-HA的鉴定 | 第145-146页 |
| 3.1.3 含AIV HA基因的转移质粒pIE-HA的构建与鉴定 | 第146-147页 |
| 3.2 重组病毒TK~-／gE~-／gI~-／HA~+的空斑筛选与纯化 | 第147-148页 |
| 3.3 重组病毒TK~-／gE~-／gI~-／HA~+的Western blot鉴定 | 第148-149页 |
| 3.4 间接免疫荧光法检测结果 | 第149页 |
| 3.5 重组病毒在细胞上的增殖滴度 | 第149-150页 |
| 3.6 重组病毒TK~-／gE~-／gI~-／HA~+免疫小鼠抗HA的ELISA抗体检测 | 第150-153页 |
| 4 讨论 | 第153-156页 |
| 5 小结 | 第156-157页 |
| 参考文献 | 第157-164页 |
| 缩略词 | 第164-166页 |
| 附录 | 第166-169页 |
| 致谢 | 第169页 |
