| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| 1.1 精氨酸激酶研究概况 | 第9-12页 |
| 1.1.1 精氨酸激酶的作用机理和蛋白性质 | 第9-10页 |
| 1.1.2 金属离子对精氨酸激酶的影响 | 第10页 |
| 1.1.3 精氨酸激酶与肌酸激酶的关系 | 第10-11页 |
| 1.1.4 精氨酸激酶与免疫力和抗性之间的关系 | 第11-12页 |
| 1.1.5 精氨酸激酶在生物防治中的研究 | 第12页 |
| 1.2 乙酰胆碱酯酶的研究概况 | 第12-16页 |
| 1.2.1 胆碱酯酶的分类和作用 | 第13页 |
| 1.2.2 AChE 在体内的组织分布与构型 | 第13-14页 |
| 1.2.3 AChE 与神经传导的关系 | 第14页 |
| 1.2.4 AChE 基因的克隆 | 第14-15页 |
| 1.2.5 AChE 在昆虫的抗药性关系 | 第15-16页 |
| 1.3 苏云金芽孢杆菌的简介 | 第16-19页 |
| 1.3.1 伴孢晶体的作用机理 | 第17-18页 |
| 1.3.2 伴孢晶体的提取方法 | 第18-19页 |
| 1.3.3 棉铃虫对 Bt 毒蛋白的抗性研究 | 第19页 |
| 1.4 论文目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 精氨酸激酶和乙酰胆碱酯酶基因的克隆 | 第21-36页 |
| 2.1 实验材料、试剂和仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 主要菌种及实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 总 RNA 的提取 | 第22页 |
| 2.2.2 cDNA 第一条链的合成 | 第22-23页 |
| 2.2.3 化学法感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.4 大肠杆菌的化学转化 | 第24页 |
| 2.2.5 质粒 DNA 的少量提取 | 第24-25页 |
| 2.2.6 试剂盒回收 PCR 目的条带 | 第25页 |
| 2.3 精氨酸激酶基因的克隆 | 第25-29页 |
| 2.3.1 RNA 的提取与 cDNA 的合成 | 第25-26页 |
| 2.3.2 引物的设计和合成 | 第26页 |
| 2.3.3 基因克隆和测序 | 第26-29页 |
| 2.4 棉铃虫乙酰胆碱酯酶基因 ace-2 的克隆 | 第29-33页 |
| 2.4.1 RNA 的提取与 cDNA 的合成 | 第29页 |
| 2.4.2 引物设计 | 第29页 |
| 2.4.3 基因克隆和测序 | 第29-33页 |
| 2.5 ArK 和 AchE 的进化分析 | 第33-35页 |
| 2.6 结论 | 第35-36页 |
| 第三章 Cry1A 毒蛋白对 AK 表达量影响 | 第36-41页 |
| 3.1 实验材料、试剂、仪器设备 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 晶胞和悬浮液的制备 | 第36-37页 |
| 3.2.2 伴孢晶体的镜检与结果 | 第37页 |
| 3.2.3 供试昆虫处理饲料的制备和处理 | 第37页 |
| 3.2.4 处理虫样总 RNA 的提取 | 第37-38页 |
| 3.2.5 单链 cDNA 的合成 | 第38页 |
| 3.3 RT-PCR 反应 | 第38-40页 |
| 3.3.1 引物的设计合成和 PCR 反应 | 第38页 |
| 3.3.2 内参基因的扩增 | 第38页 |
| 3.3.3 循环数的优化 | 第38-39页 |
| 3.3.4 半定量 RT-PCR 表达结果和分析 | 第39-40页 |
| 3.4 结论 | 第40-41页 |
| 第四章 灭多威对 AChE 表达量影响 | 第41-45页 |
| 4.1 实验试剂和仪器 | 第41页 |
| 4.2 铃虫的饲喂 | 第41页 |
| 4.3 RNA 的提取和 cDNA 的获得 | 第41页 |
| 4.4 荧光定量的反应程序及数据分析 | 第41-43页 |
| 4.4.1 荧光定量引物的设计 | 第41-42页 |
| 4.4.2 荧光定量体系 | 第42页 |
| 4.4.3 荧光定量反应程序 | 第42页 |
| 4.4.4 数据分析 | 第42-43页 |
| 4.5 结论 | 第43-45页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第54页 |