| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一部分 引言 | 第10-25页 |
| 1 新技术和产业背景下研究稻瘟病的重大意义 | 第10-11页 |
| 2 水稻的“癌症”——稻瘟病 | 第11-16页 |
| 2.1 水稻概述 | 第11-12页 |
| 2.2 稻瘟菌对寄主的侵染 | 第12-16页 |
| 2.2.1 稻瘟菌侵染循环 | 第12-15页 |
| 2.2.2 稻瘟菌活体营养生长与植物防御响应 | 第15-16页 |
| 3 高等丝状病原真菌活体营养侵染基础 | 第16-20页 |
| 3.1 营养、侵染阶段二态性 | 第16页 |
| 3.2 极性生长 | 第16-17页 |
| 3.3 胞吐作用和胞吞作用 | 第17-18页 |
| 3.4 膜系统与蛋白分泌 | 第18-20页 |
| 4 稻瘟菌生理小种与进化动力学 | 第20-21页 |
| 5 富含半胱氨酸小分泌蛋白研究现状及立题意义 | 第21-25页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第25-37页 |
| 1 实验材料 | 第25-26页 |
| 1.1 供试菌株 | 第25页 |
| 1.2 供试载体 | 第25-26页 |
| 1.3 植物材料 | 第26页 |
| 1.4 培养基 | 第26页 |
| 1.5 生化试剂 | 第26页 |
| 2 试验方法 | 第26-37页 |
| 2.1 生物信息学分析 | 第26-28页 |
| 2.1.1 相关的数据库 | 第26-27页 |
| 2.1.2 相关的软件 | 第27页 |
| 2.1.3 基本分析思路 | 第27-28页 |
| 2.2 载体构建 | 第28-30页 |
| 2.2.1 片段的PCR扩增 | 第28页 |
| 2.2.2 DNA琼脂糖电泳 | 第28页 |
| 2.2.3 制备外源质粒敏感型细菌感受态细胞 | 第28-29页 |
| 2.2.4 细菌热击转化、挑选与扩培 | 第29页 |
| 2.2.5 细菌质粒相关实验 | 第29-30页 |
| 2.3 稻瘟菌转化 | 第30-31页 |
| 2.3.1 稻瘟病菌原生质体的制备 | 第30页 |
| 2.3.2 稻瘟病菌原生质体PEG介导转化和转化子的验证 | 第30-31页 |
| 2.3.3 稻瘟病菌分生孢子农杆菌介导转化和转化子的验证 | 第31页 |
| 2.4 稻瘟病菌遗传物质提取相关实验 | 第31-33页 |
| 2.4.1 稻瘟病菌DNA的提取 | 第31页 |
| 2.4.2 稻瘟病菌RNA的提取和相关实验 | 第31-33页 |
| 2.5 水稻原生质体瞬时表达 | 第33页 |
| 2.5.1 水稻原生质体的制备 | 第33页 |
| 2.5.2 水稻原生质体转化 | 第33页 |
| 2.6 表型分析 | 第33-37页 |
| 2.6.1 生长情况和生长速率测定 | 第33-34页 |
| 2.6.2 产孢情况和产孢量测定 | 第34页 |
| 2.6.3 孢子的萌发率与附着胞的形成率测定 | 第34页 |
| 2.6.4 植物离体侵染实验 | 第34-35页 |
| 2.6.5 荧光检测 | 第35页 |
| 2.6.6 病斑数字化分析 | 第35-36页 |
| 2.6.7 致病性的病级分析 | 第36页 |
| 2.6.8 光脱色荧光恢复(FRAP)实验 | 第36-37页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第37-60页 |
| 1 稻瘟病菌MoSCRiS蛋白家族序列特性 | 第37-40页 |
| 1.1 具有高度保守性 | 第37页 |
| 1.2 具有与效应子蛋白相似的特性 | 第37-38页 |
| 1.3 具有蛋白序列多态性 | 第38-40页 |
| 1.4 序列复杂变化源自种内拷贝和种间分化 | 第40页 |
| 2 整体转录水平很低 | 第40-41页 |
| 3 稻瘟病菌MoSCRiS蛋白家族功能分析实验概述 | 第41-42页 |
| 4 稻瘟菌(Guy11)-水稻(TP309)分泌蛋白可视化表达系统 | 第42-43页 |
| 5 MoSCRiS1 (MGG_17155) | 第43-53页 |
| 5.1 序列变化伴随稻瘟群体进化而趋于稳定 | 第43-44页 |
| 5.2 具有脂蛋白和脂蛋白酶同源性 | 第44-45页 |
| 5.3 组成型强启动子让MoSCRiS1表达可视化 | 第45页 |
| 5.4 过量表达不影响营养生长 | 第45-47页 |
| 5.5 过量表达对营养生长阶段定位造成一定影响 | 第47页 |
| 5.6 过量表达部分定位于内质网膜系统 | 第47-48页 |
| 5.7 过量表达在侵染阶段定位多样 | 第48-50页 |
| 5.8 过量表达在不同寄主表达定位存在差异 | 第50-51页 |
| 5.9 特定序列决定在植物中的定位 | 第51页 |
| 5.10 过量表达有利于稻瘟病菌前期的侵染 | 第51-53页 |
| 5.11 不同背景菌株过量表达在不同寄主上存在致病性差异 | 第53页 |
| 6 MoSCRiS2(MGG_17227) | 第53-56页 |
| 6.1 定位于细胞质外的活体营养侵染结构 | 第53-54页 |
| 6.2 光漂白荧光恢复实验验证持续性表达 | 第54-55页 |
| 6.3 最终分泌进入植物细胞 | 第55-56页 |
| 6.4 去信号肽序列不具有跨膜信号 | 第56页 |
| 7 MoSCRiS4(MGG_17587) | 第56-57页 |
| 8 MoSCRiS8(70-15-3)与Mopeptidase(MGG_10942) | 第57-58页 |
| 9 侵染过程中活体营养界面复合体存在的现象 | 第58-60页 |
| 9.1 侵染过程中活体营养界面复合体的破损 | 第58-59页 |
| 9.2 活体营养界面复合体在侵染不同寄主是具有大小差异 | 第59-60页 |
| 第四部分 小结与讨论 | 第60-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 附录 | 第76-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
