| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-20页 |
| 1 核盘菌简介 | 第9-13页 |
| 1.1 核盘菌的分类地位 | 第9页 |
| 1.2 核盘菌的生活史及其侵染循环 | 第9-11页 |
| 1.3 菌核病的症状 | 第11页 |
| 1.4 菌核病的危害及其防治 | 第11-13页 |
| 2 核盘菌菌核的发育 | 第13-14页 |
| 3 核盘菌子囊盘的萌发 | 第14-15页 |
| 4 丝状真菌基因功能研究进展 | 第15-17页 |
| 4.1 转座子标签技术 | 第15-16页 |
| 4.2 RNA 干扰技术 | 第16页 |
| 4.3 超表达技术 | 第16页 |
| 4.4 基因敲除 | 第16-17页 |
| 5 Forkhead-box 转录因子的研究进展 | 第17-18页 |
| 6 本研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 核盘菌 Ss-FoxE2 序列分析及敲除载体的构建 | 第20-33页 |
| 1 材料 | 第20-22页 |
| 1.1 实验菌株 | 第20页 |
| 1.2 载体及引物 | 第20页 |
| 1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 1.4 常用培养基配方及主要试剂配制方法 | 第21页 |
| 1.5 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 2 方法 | 第22-28页 |
| 2.1 核盘菌转录因子 Ss-FoxE2 上下游序列的克隆 | 第22-26页 |
| 2.2 敲除载体 pXEH-R-L 的构建及重组质粒鉴定 | 第26-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-32页 |
| 3.1 Ss-FoxE2 的生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 3.2 PCR 克隆核盘菌 Ss-FoxE2 上下游片段结果 | 第29页 |
| 3.3 重组质粒 T-F2-L 和 T-F2-R 双酶切检测结果 | 第29-30页 |
| 3.4 构建重组质粒 pXEH-R 的检测结果 | 第30-31页 |
| 3.5 构建重组质粒 pXEH-R-L 的检测结果 | 第31-32页 |
| 4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 核盘菌原生质体转化及敲除转化子的鉴定 | 第33-51页 |
| 1 材料 | 第33-35页 |
| 1.1 菌株 | 第33页 |
| 1.2 引物及序列 | 第33页 |
| 1.3 主要试剂 | 第33-34页 |
| 1.4 常用培养基配方及主要试剂配制方法 | 第34-35页 |
| 1.5 主要实验仪器 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-44页 |
| 2.1 核盘菌原生质体的制备 | 第35-36页 |
| 2.2 PEG-CaCl2法原生质体转化 | 第36页 |
| 2.3 重组转化子的抗性筛选 | 第36-37页 |
| 2.4 快速 PCR 法初步鉴定核盘菌转化子 | 第37-39页 |
| 2.5 Southern 杂交方法鉴定转化子 | 第39-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-49页 |
| 3.1 核盘菌原生质体的制备 | 第44-45页 |
| 3.2 核盘菌原生质体的转化 | 第45页 |
| 3.3 快速 PCR 法初步鉴定核盘菌转化子的结果 | 第45-47页 |
| 3.4 Southern blotting 转化子验证结果 | 第47-49页 |
| 4 小结 | 第49-51页 |
| 第四章 核盘菌转录因子 Ss-FoxE2 的互补 | 第51-63页 |
| 1 材料 | 第51-52页 |
| 1.1 实验菌株 | 第51页 |
| 1.2 载体及引物 | 第51-52页 |
| 1.3 主要试剂 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-57页 |
| 2.1 核盘菌转录因子 Ss-FoxE2 互补载体的构建 | 第52-55页 |
| 2.2 敲除菌株原生质体的制备 | 第55-56页 |
| 2.3 PEG-CaCl2法原生质体互补转化 | 第56页 |
| 2.4 互补转化子的抗性筛选 | 第56页 |
| 2.5 快速 PCR 法鉴定互补转化子 | 第56-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-61页 |
| 3.1 互补转化子的转录因子 Ss-FoxE2 部分序列 PCR 验证结果 | 第57-58页 |
| 3.2 遗传霉素 G418 抗性基因序列 PCR 验证结果 | 第58-59页 |
| 3.3 互补序列 C-F2 的 PCR 验证结果： | 第59-60页 |
| 3.4 互补转化子的 Ss-FoxE2 编码区 ORF 序列 PCR 验证结果 | 第60-61页 |
| 4 小结 | 第61-63页 |
| 第五章 核盘菌转录因子 Ss-FoxE2 的功能分析 | 第63-74页 |
| 1 材料 | 第63页 |
| 1.1 菌株 | 第63页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第63页 |
| 2 方法 | 第63-65页 |
| 2.1 菌丝生长速度测定 | 第63-64页 |
| 2.2 菌丝形态及侵染结构的观察 | 第64页 |
| 2.3 核盘菌 Ss-FoxE2 突变体的致病性分析 | 第64页 |
| 2.4 核盘菌菌核的大量培养 | 第64-65页 |
| 2.5 核盘菌子囊盘的诱导 | 第65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-73页 |
| 3.1 菌丝生长形态观察及生长速度测定 | 第65-67页 |
| 3.2 菌丝形态显微观察 | 第67-69页 |
| 3.3 菌核数量及干重测量结果 | 第69-70页 |
| 3.4 致病性分析结果 | 第70-71页 |
| 3.5 子囊盘的诱导结果 | 第71-73页 |
| 4 小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
