| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 背景 | 第10-20页 |
| 1.1 人参皂苷 | 第10-14页 |
| 1.1.1 人参皂苷概述 | 第10页 |
| 1.1.2 人参皂苷的结构和分类 | 第10-12页 |
| 1.1.3 人参皂苷的提取 | 第12页 |
| 1.1.4 人参皂苷的生物合成途径及相关酶 | 第12-14页 |
| 1.2 人参皂苷微生物合成的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3 毕赤酵母表达系统 | 第16-17页 |
| 1.3.1 毕赤酵母概述 | 第16页 |
| 1.3.2 甲醇诱导机制 | 第16页 |
| 1.3.3 毕赤酵母中典型的启动子 | 第16-17页 |
| 1.4 毕赤酵母无标记基因打靶操作系统 | 第17-19页 |
| 1.5 本课题研究目的及内容 | 第19-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂配制 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要培养基配方 | 第21-22页 |
| 2.1.4 引物序列 | 第22-24页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.7 实验所设计软件 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 常规分子生物学实验操作 | 第25-28页 |
| 2.2.2 毕赤酵母转化 | 第28-29页 |
| 2.2.3 毕赤酵母发酵及产物提取 | 第29-30页 |
| 2.2.4 产物的检测 | 第30-32页 |
| 第3章 毕赤酵母中达玛烯二醇合成途径的导入及强化 | 第32-45页 |
| 3.1 方法与步骤 | 第32-39页 |
| 3.1.1 达玛烯二醇合成酶基因的获得 | 第32-35页 |
| 3.1.2 erg1基因的获得 | 第35-36页 |
| 3.1.3 重组毕赤酵母的构建 | 第36-38页 |
| 3.1.4 毕赤酵母发酵及产物提取 | 第38-39页 |
| 3.1.5 产物检测 | 第39页 |
| 3.2 实验结果与讨论 | 第39-43页 |
| 3.2.1 重组毕赤酵母的构建 | 第39-42页 |
| 3.2.2 重组毕赤酵母GSK,GSKD和GSKED的发酵及产物检测 | 第42-43页 |
| 3.3 小结 | 第43-45页 |
| 第4章 毕赤酵母无标记打靶工具的构建及羊毛甾醇合成酶基因启动子的弱化 | 第45-59页 |
| 4.1 方法与步骤 | 第45-51页 |
| 4.1.1 无标记打靶系统的构建(以HIS4基因敲除为例) | 第45-47页 |
| 4.1.2 毕赤酵母的转化及阳性HIS4敲除菌的筛选 | 第47-48页 |
| 4.1.3 甲醇诱导的Cre-lox系统重组剪切获得抗性缺失菌株 | 第48页 |
| 4.1.4 GSKED菌株羊毛甾醇合成酶基因erg7启动子弱化 | 第48-51页 |
| 4.2 实验结果与讨论 | 第51-58页 |
| 4.2.1 无标记打靶系统的构建(以HIS4基因敲除为例) | 第51-54页 |
| 4.2.2 毕赤酵母的转化及阳性HIS4敲除菌的筛选 | 第54页 |
| 4.2.3 甲醇诱导的Cre-lox系统重组剪切获得抗性缺失菌株 | 第54-55页 |
| 4.2.4 GSKED菌株erg7启动子无标记替换为硫胺素阻遏型P_(THI11)启动子 | 第55-57页 |
| 4.2.5 GSKED-P_(THI11)重组菌的发酵及产物验证 | 第57-58页 |
| 4.3 小结 | 第58-59页 |
| 第5章 添加角鲨烯对菌株生长及达玛烯二醇产量的影响 | 第59-62页 |
| 5.1 方法与步骤 | 第59-60页 |
| 5.1.1 培养基中添加角鲨烯对GSK与GSKED-P_(THI11)发酵的影响 | 第59-60页 |
| 5.2 实验结果与讨论 | 第60-61页 |
| 5.2.1 角鲨烯添加对菌体生物量的影响 | 第60页 |
| 5.2.2 角鲨烯添加对GSK与GSKED-P_(THI11)达玛二烯产量的影响 | 第60-61页 |
| 5.3 小结 | 第61-62页 |
| 第6章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 6.1 课题总结 | 第62页 |
| 6.2 展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
