| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 前言 | 第12-19页 |
| 丙型肝炎病毒 | 第12-14页 |
| 干扰素IFN | 第14-19页 |
| 研究目的与意义 | 第19-22页 |
| 1 本研究的目的 | 第19页 |
| 2 本研究的意义 | 第19页 |
| 3 本研究的技术路线 | 第19-22页 |
| 第一部分 Ⅰ型干扰素(IFN-α)和Ⅲ型干扰素(IFN-λ)激活干扰素信号传导通路及ISG表达的时间效应曲线的差异性及高表达质粒转染条件的优化 | 第22-43页 |
| 材料与方法 | 第22-34页 |
| 1 实验材料 | 第22-27页 |
| 1.1 供试材料 | 第22页 |
| 1.2 转染质粒 | 第22页 |
| 1.3 扩增引物 | 第22-23页 |
| 1.4 分子生物学及化学试剂 | 第23-25页 |
| 1.5 缓冲液及试剂配置 | 第25-26页 |
| 1.6 仪器设备及耗材 | 第26-27页 |
| 1.7 分子生物学软件 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.1 高表达质粒转染体系的优化 | 第27-32页 |
| 2.2 Ⅰ型干扰素(IFN-α)和Ⅲ型干扰素(IFN-λ)时间效应曲线 | 第32-33页 |
| 2.3 数据分析 | 第33-34页 |
| 研究结果 | 第34-41页 |
| 1 高表达质粒转染体系的优化 | 第34-37页 |
| 1.1 转染试剂使用量,转染质粒量的筛选 | 第34-35页 |
| 1.2 质粒pCR3.1/USP18和pCR3.1/SOCS1在mRNA水平和蛋白水平验证 | 第35-36页 |
| 1.3 IFN浓度的筛选 | 第36-37页 |
| 2 IFN-α和IFN-λ激活Jak/STAT及ISG表达的时间效应曲线 | 第37-41页 |
| 2.1 IFN-α和IFN-λ激活Jak/STAT及ISG表达的时间效应曲线的比较研究 | 第37-39页 |
| 2.2 高表达USP18或SOCSI对Ⅰ型干扰素和Ⅲ型干扰素激活Jak/STAT诱导ISG表达的时间效应曲线的影响 | 第39-41页 |
| 讨论 | 第41-43页 |
| 第二部分 高表达USP18/SOCS1阻断Ⅰ型干扰素(IFN-α)和Ⅲ型干扰素(IFN-λ)信号传导通路从而促进HCV病毒的复制 | 第43-68页 |
| 材料与方法 | 第43-48页 |
| 1 实验材料 | 第43-45页 |
| 1.1 供试材料 | 第43页 |
| 1.2 转染质粒 | 第43页 |
| 1.3 扩增引物 | 第43-45页 |
| 1.4 生化试剂 | 第45页 |
| 2 实验方法 | 第45-48页 |
| 2.1 高表达USP18或SOCS1在复制子细胞中抑制ISRE活性 | 第45-46页 |
| 2.2 高表达USP18或SOCS1在复制子细胞中抑制P-STAT1磷酸化水平和ISG表达水平 | 第46页 |
| 2.3 高表达USP18或SOCS1在复制子细胞和HCVcc系统中促进HCV复制水平 | 第46页 |
| 2.4 高表达USP18或SOCS1在HCVcc系统中调节HCV受体而影响病毒入胞 | 第46-47页 |
| 2.5 高表达USP18或SOCS1在HCVcc系统中对HCV病毒分泌的影响 | 第47页 |
| 2.6 数据分析 | 第47-48页 |
| 实验结果 | 第48-65页 |
| 1 USP18/SOCS1在HCV复制子细胞(Conlb和JFH1-2a)中抑制Ⅰ型干扰素(IFN-α)和Ⅲ型干扰素(IFN-λ)信号传导通路 | 第49-59页 |
| 1.1 高表达USP18或SOCS1抑制P-STAT1磷酸化水平 | 第49-52页 |
| 1.2 高表达USP18/SOCS1降低ISRE活性 | 第52-54页 |
| 1.3 高表达USP18或SOCS1抑制ISG表达 | 第54-59页 |
| 2 USP18/SOCS1对于HCV复制水平的影响 | 第59-61页 |
| 3 USP18/SOCS1对于HCV入胞的影响 | 第61-63页 |
| 4 USP18/SOCS1对于HCV分泌的影响 | 第63-65页 |
| 讨论 | 第65-68页 |
| 第三部分 慢性丙肝病人PBMC中相关基因的表达水平与治疗疗效的相关性 | 第68-78页 |
| 材料与方法 | 第68-71页 |
| 1. 实验材料 | 第68-69页 |
| 1.1 供试材料 | 第68页 |
| 1.2 转染质粒 | 第68页 |
| 1.3 扩增引物 | 第68-69页 |
| 2 实验方法 | 第69-71页 |
| 2.1 一般资料 | 第69页 |
| 2.2 PBMC的提取 | 第69页 |
| 2.3 PBMC细胞体外培养和IFN刺激 | 第69页 |
| 2.4 PBMC细胞RNA提取及Realtime PCR检测 | 第69-70页 |
| 2.5 数据分析 | 第70-71页 |
| 实验结果 | 第71-75页 |
| 1 一般材料 | 第71-72页 |
| 2 不同组别PBMC中典型抗病毒蛋白ISG15,MxA水平 | 第72-73页 |
| 3 不同组别PBMC中负调控因子USP18,SOCS1水平 | 第73-74页 |
| 4 不同组别PBMC中IFN受体水平IFNAR1,IFNλR表达水平 | 第74-75页 |
| 讨论 | 第75-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 文献综述 | 第84-97页 |
| 参考文献 | 第93-97页 |
| 附录 | 第97-106页 |
| 符号与缩略语 | 第97-100页 |
| 实验补充结果 | 第100-106页 |
| 个人简历 | 第106页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第106-107页 |
| 在学期间申报获批的课题 | 第107页 |
| 在学期间参加学术交流情况 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
