| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-16页 |
| 1 植物过敏性反应的研究进展 | 第11-13页 |
| 2 小麦转基因技术的研究进展 | 第13-16页 |
| 第一章 小麦 TaHIR2 基因克隆及序列分析 | 第16-37页 |
| 1 材料和方法 | 第17-28页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第17页 |
| ·供试菌种和小麦品种 | 第17页 |
| ·取样量与取样时间 | 第17页 |
| ·载体与菌株 | 第17-18页 |
| ·溶液与培养基的配制 | 第18页 |
| ·培养基的配制 | 第18页 |
| ·常规溶液的配制 | 第18页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 基因全长cDNA 序列的获得 | 第18-24页 |
| ·总RNA 的提取（NaAc/无水乙醇沉淀法） | 第18-19页 |
| ·总RNA 纯度及完整性的检测 | 第19页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 基因全长cDNA 序列的扩增 | 第19-21页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第21-22页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第23-24页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 基因的ORF 序列扩增 | 第24-26页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·总 RNA 的提取（NaAc/无水乙醇沉淀法） | 第24页 |
| ·总 RNA 纯度及完整性的检测 | 第24页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第24-25页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 基因的ORF 序列扩增 | 第25页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第25页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第26页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 基因的 DNA 序列克隆 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·小麦叶片DNA 的提取 | 第26页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 基因的 DNA 序列扩增 | 第26-27页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 基因的生物信息学分析 | 第27-28页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 基因的比对分析 | 第27页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 氨基酸序列的分析 | 第27页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 亲缘关系分析 | 第27-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-36页 |
| ·扩增模板的制备 | 第28-29页 |
| ·总RNA 纯度及产量检测结果 | 第28页 |
| ·小麦叶片基因组DNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 基因cDNA 全长序列的扩增 | 第29-31页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 基因的ORF 序列扩增 | 第31页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白2 基因的DNA 序列扩增 | 第31-33页 |
| ·TaHIR2 基因的生物信息学分析 | 第33-36页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第33-34页 |
| ·功能结构域分析 | 第34页 |
| ·TaHIR2 基因内含子序列分析 | 第34页 |
| ·TaHIR2 的亲缘关系分析 | 第34-36页 |
| 3 讨论 | 第36-37页 |
| ·小麦叶片总 RNA 的提取 | 第36页 |
| ·关于小麦 TaHIR2 基因 | 第36-37页 |
| 第二章 小麦 TaHIR2 的时空表达模式分析 | 第37-45页 |
| 1 材料和方法 | 第38-41页 |
| ·小麦品种与供试菌种 | 第38页 |
| ·仪器和试剂 | 第38页 |
| ·小麦叶片总RNA 的提取和纯化 | 第38页 |
| ·小麦TaHIR2 的时空表达模式分析 | 第38-41页 |
| ·引物设计 | 第38-39页 |
| ·最佳退火温度的摸索 | 第39页 |
| ·实时定量PCR 扩增 | 第39页 |
| ·仪器操作流程 | 第39-40页 |
| ·标准曲线的制备 | 第40页 |
| ·样品的荧光定量分析 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-44页 |
| ·退火温度的摸索 | 第41页 |
| ·小麦GAPDH 标准曲线的制作 | 第41-42页 |
| ·小麦TaHIR2 标准曲线的制作 | 第42页 |
| ·小麦TaHIR2 在叶锈菌侵染不同时间点的表达模式分析 | 第42-43页 |
| ·TaHIR2 在不同小麦组织中的表达模式分析 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 第三章 TaHIR2 蛋白水平表达模式分析 | 第45-60页 |
| 1 材料与方法 | 第46-54页 |
| ·菌株与质粒 | 第46页 |
| ·仪器和试剂 | 第46页 |
| ·试剂的配制 | 第46-47页 |
| ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳所用试剂 | 第46-47页 |
| ·蛋白纯化所用试剂 | 第47页 |
| ·方法与步骤 | 第47-54页 |
| ·小麦TaHIR2 开放阅读框（ORF）的扩增 | 第47-48页 |
| ·融合表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白的大量纯化及抗体的制备 | 第51-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-59页 |
| ·小麦 TaHIR2 ORF 的获得及验证 | 第54页 |
| ·融合表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·IPTG 浓度对小麦 TaHIR2 蛋白表达的影响 | 第55-56页 |
| ·诱导时间对小麦 TaHIR2 表达的影响 | 第56-57页 |
| ·重组蛋白TaHIR2-pET-30a(+)的纯化 | 第57页 |
| ·小麦TaHIR2 抗体特异性检测 | 第57-58页 |
| ·TaHIR2 蛋白在受叶锈菌侵染的小麦中的表达模式 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-60页 |
| 第四章 TaHIR2 基因植物表达载体构建及再生小麦幼苗获得 | 第60-69页 |
| 1 材料与方法 | 第61-66页 |
| ·植物材料 | 第61页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第61页 |
| ·培养基及其配方 | 第61页 |
| ·TaHIR2 基因超表达载体构建 | 第61-64页 |
| ·引物的设计与合成 | 第61-62页 |
| ·目的片段的扩增 | 第62页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第62页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第62页 |
| ·重组质粒的转化 | 第62页 |
| ·重组质粒的筛选与测序 | 第62页 |
| ·酶切及酶切产物的回收 | 第62-63页 |
| ·目的片段与转基因载体pAHC-25 的连接 | 第63-64页 |
| ·重组转基因质粒转化大肠杆菌DH5α | 第64页 |
| ·小麦转化和植株再生 | 第64-66页 |
| ·小麦胚性愈伤组织的诱导及继代 | 第64页 |
| ·基因枪法转化小麦胚性愈伤组织 | 第64-65页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选及小麦植株再生 | 第65-66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-68页 |
| ·TaHIR2 植物表达载体的构建 | 第66页 |
| ·小麦胚性愈伤组织培养各阶段及转化子筛选结果 | 第66-68页 |
| 3 讨论 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第75-76页 |
| 作者简历 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
