摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-7页 |
缩略词及英汉对照 | 第8-15页 |
第1章 前言 | 第15-27页 |
1.1 研究背景 | 第15-25页 |
1.1.1 参与花色素苷生物合成调控的MYB转录因子 | 第16-19页 |
1.1.2 bHLH转录因子 | 第19-21页 |
1.1.3 WD40转录因子 | 第21-22页 |
1.1.4 MBW(MYB-b HLH-WD40)复合体调控花色素苷生物合成 | 第22-23页 |
1.1.5 MBW转录复合体的转录后调控 | 第23-24页 |
1.1.6 其他调控花色素苷合成的转录因子 | 第24页 |
1.1.7 转录组测序加快新基因的发现 | 第24-25页 |
1.2 荔枝果皮花色素苷生物合成研究进展 | 第25-26页 |
1.3 本研究的主要内容和意义 | 第26-27页 |
第2章 LcMYB1转录因子的功能研究 | 第27-37页 |
2.1 引言 | 第27页 |
2.2 材料与方法 | 第27-30页 |
2.2.1 材料 | 第27页 |
2.2.2 植物表达载体构建及农杆菌转化 | 第27页 |
2.2.3 农杆菌介导的烟草瞬时表达及稳定遗传转化 | 第27-28页 |
2.2.4 花色素苷含量测定及组分分析 | 第28页 |
2.2.5 RNA提取、逆转录及荧光定量PCR | 第28-30页 |
2.3 结果与分析 | 第30-35页 |
2.3.1 LcMYB1在烟草叶片中瞬时表达分析 | 第30页 |
2.3.2 LcMYB1稳定遗传转化烟草的表型分析 | 第30-33页 |
2.3.3 转基因烟草花色素苷生物合成转录因子的表达分析 | 第33页 |
2.3.4 转基因烟草花色素苷生物合成结构基因的表达分析 | 第33-35页 |
2.4 讨论 | 第35-36页 |
2.5 本章小结 | 第36-37页 |
第3章 荔枝果皮转录组测序与分析 | 第37-66页 |
3.1 引言 | 第37页 |
3.2 材料与方法 | 第37-40页 |
3.2.1 材料 | 第37页 |
3.2.2 类黄酮及叶绿素含量测定 | 第37页 |
3.2.3 RNA提取、文库构建及测序 | 第37-38页 |
3.2.4 Denovo组装和功能预测 | 第38页 |
3.2.5 差异表达分析 | 第38页 |
3.2.6 荧光定量PCR | 第38-39页 |
3.2.7 系统进化树分析 | 第39-40页 |
3.2.8 在烟草叶片中瞬时表达验证LcSGR和LcPPH的功能 | 第40页 |
3.3 结果与分析 | 第40-60页 |
3.3.1 三个发育阶段荔枝果皮叶绿素和类黄酮含量 | 第40-41页 |
3.3.2 转录组组装结果分析 | 第41-42页 |
3.3.3 Unigene在数据库中的比对和功能注释 | 第42-43页 |
3.3.4 Unigene的GO功能分类 | 第43-44页 |
3.3.5 表达谱测序及分析 | 第44-45页 |
3.3.6 荔枝果皮三个发育阶段的差异基因鉴定 | 第45-54页 |
3.3.7 荔枝发育过程中果皮叶绿素降解代谢途径分析 | 第54-56页 |
3.3.8 荔枝发育过程中果皮类黄酮代谢途径分析 | 第56-58页 |
3.3.9 表达谱数据和荧光定量PCR结果的相关性分析 | 第58页 |
3.3.10 MYB基因家族分析及可能参与类黄酮生物合成的转录因子预测 | 第58-60页 |
3.4 讨论 | 第60-65页 |
3.4.1 荔枝果皮转录组组装 | 第60-61页 |
3.4.2 荔枝果皮发育相关的重要候选基因 | 第61页 |
3.4.3 SGR在荔枝果皮叶绿素降解过程中起着关键作用 | 第61-62页 |
3.4.4 参与类黄酮生物合成的结构基因 | 第62-64页 |
3.4.5 参与类黄酮生物合成的MYB转录因子 | 第64-65页 |
3.5 本章小结 | 第65-66页 |
第4章 LcbHLH与LcMYB1互作调控荔枝果皮花色素苷的合成 | 第66-89页 |
4.1 引言 | 第66页 |
4.2 材料与方法 | 第66-71页 |
4.2.1 材料 | 第66页 |
4.2.2 花色素苷含量测定 | 第66页 |
4.2.3 RNA提取及cDNA的合成 | 第66-67页 |
4.2.4 基因克隆及序列分析 | 第67页 |
4.2.5 荧光定量PCR | 第67-68页 |
4.2.6 烟草瞬时表达及稳定遗传转化 | 第68页 |
4.2.7 亚细胞定位分析 | 第68-69页 |
4.2.8 酵母双杂交实验 | 第69-70页 |
4.2.9 荧光双分子互补(BiFC)实验 | 第70-71页 |
4.2.10 双荧光报告基因实验 | 第71页 |
4.3 结果与分析 | 第71-85页 |
4.3.1 三个可能与花色素苷合成相关的b HLH转录因子的克隆和序列分析 | 第71-75页 |
4.3.2 三个LcbHLH和LcMYB1转录因子的亚细胞定位分析 | 第75-76页 |
4.3.3 LcbHLHs和LcMYB1转录因子相互作用分析 | 第76-78页 |
4.3.4 LcbHLHs转录因子在荔枝组织中的表达分析 | 第78-82页 |
4.3.5 LcbHLHs与LcMYB1转录因子在烟草叶片中瞬时表达 | 第82页 |
4.3.6 LcMYB1或/和LcbHLH3在烟草中过量表达 | 第82-84页 |
4.3.7 LcbHLH和LcMYB1与花色素苷生物合成结构基因启动子区域互作分析 | 第84-85页 |
4.4 讨论 | 第85-88页 |
4.4.1 荔枝bHLH转录因子的克隆及分析 | 第85-86页 |
4.4.2 LcbHLHs与LcMYB1互作调控花色素苷合成 | 第86-87页 |
4.4.3 LcMYB1-LcbHLH复合体通过转录激活ANS和DFR诱导花色素苷积累 | 第87-88页 |
4.5 本章小结 | 第88-89页 |
第5章 LcMYB5的功能研究 | 第89-104页 |
5.1 引言 | 第89页 |
5.2 材料和方法 | 第89-91页 |
5.2.1 材料 | 第89页 |
5.2.2 花色素苷含量测定、RNA提取及cDNA合成 | 第89页 |
5.2.3 基因克隆及序列分析 | 第89-90页 |
5.2.4 农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第90页 |
5.2.5 烟草叶片和花瓣p H测定 | 第90页 |
5.2.6 荧光定量PCR | 第90页 |
5.2.7 亚细胞定位分析 | 第90页 |
5.2.8 酵母双杂交 | 第90-91页 |
5.2.9 荧光双分子互补(BiFC)实验 | 第91页 |
5.2.10 双荧光报告实验 | 第91页 |
5.3 结果与分析 | 第91-101页 |
5.3.1 LcMYB5的克隆及序列分析 | 第91-93页 |
5.3.2 LcMYB5在不同组织器官和发育阶段果皮中的表达分析 | 第93-94页 |
5.3.3 LcMYB5在烟草中过量表达的表型 | 第94-96页 |
5.3.4 LcMYB5在烟草中过表达对烟草內源结构和调控基因的影响 | 第96-97页 |
5.3.5 LcMYB5在烟草中过量表达对花瓣大小和组织p H的影响 | 第97-98页 |
5.3.6 LcMYB5对花色素苷合成结构基因启动子活力的影响 | 第98页 |
5.3.7 LcMYB5的亚细胞定位及与b HLH蛋白的互作分析 | 第98-101页 |
5.4 讨论 | 第101-103页 |
5.4.1 LcMYB5属于特殊的小亚组 | 第101页 |
5.4.2 LcMYB5在荔枝中组成型表达 | 第101页 |
5.4.3 LcMYB5在烟草中过量表达时表现多种功能 | 第101-103页 |
5.4.4 LcMYB5是MYB-b HLH复合体的成员之一 | 第103页 |
5.5 本章小结 | 第103-104页 |
第6章 LcMYB2的功能研究 | 第104-116页 |
6.1 引言 | 第104页 |
6.2 材料与方法 | 第104-106页 |
6.2.1 材料 | 第104页 |
6.2.2 基因克隆测序及分析 | 第104页 |
6.2.3 RNA提取、逆转录及荧光定量PCR | 第104-105页 |
6.2.4 烟草中过表达LcMYB2 | 第105页 |
6.2.5 亚细胞定位实验 | 第105页 |
6.2.6 荧光双分子互补实验 | 第105页 |
6.2.7 双荧光报告实验 | 第105-106页 |
6.3 结果与分析 | 第106-113页 |
6.3.1 LcMYB2的克隆及序列分析 | 第106-108页 |
6.3.2 LcMYB2的表达分析 | 第108-109页 |
6.3.3 转LcMYB2基因烟草表型分析 | 第109-110页 |
6.3.4 转基因烟草内源花色素苷和原花青素生物合成相关基因表达分析 | 第110-112页 |
6.3.5 LcMYB2亚细胞定位和与b HLH3相互情况分析 | 第112-113页 |
6.3.6 LcMYB2激活原花青素生物合成结构基因启动子 | 第113页 |
6.4 讨论 | 第113-115页 |
6.4.1 LcMYB2是Vv MYB5b亚组中的新成员 | 第113-114页 |
6.4.2 LcMYB2与原花青素生物合成相关基因表达模式相同 | 第114页 |
6.4.3 在烟草中过表达LcMYB2影响花药和花粉的发育 | 第114-115页 |
6.4.4 LcMYB2与LcbHLH3转录因子相互作用共同调控原花青素合成 | 第115页 |
6.5 本章小结 | 第115-116页 |
第7章 全文结论、创新之处和展望 | 第116-119页 |
7.1 全文结论 | 第116-118页 |
7.2 创新之处 | 第118页 |
7.3 展望 | 第118-119页 |
致谢 | 第119-120页 |
参考文献 | 第120-137页 |
在读期间发表论文及奖励 | 第137页 |