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荔枝果皮花色素苷生物合成关键调控因子的筛选及其功能验证

摘要第3-5页
Abstract第5-7页
缩略词及英汉对照第8-15页
第1章 前言第15-27页
    1.1 研究背景第15-25页
        1.1.1 参与花色素苷生物合成调控的MYB转录因子第16-19页
        1.1.2 bHLH转录因子第19-21页
        1.1.3 WD40转录因子第21-22页
        1.1.4 MBW(MYB-b HLH-WD40)复合体调控花色素苷生物合成第22-23页
        1.1.5 MBW转录复合体的转录后调控第23-24页
        1.1.6 其他调控花色素苷合成的转录因子第24页
        1.1.7 转录组测序加快新基因的发现第24-25页
    1.2 荔枝果皮花色素苷生物合成研究进展第25-26页
    1.3 本研究的主要内容和意义第26-27页
第2章 LcMYB1转录因子的功能研究第27-37页
    2.1 引言第27页
    2.2 材料与方法第27-30页
        2.2.1 材料第27页
        2.2.2 植物表达载体构建及农杆菌转化第27页
        2.2.3 农杆菌介导的烟草瞬时表达及稳定遗传转化第27-28页
        2.2.4 花色素苷含量测定及组分分析第28页
        2.2.5 RNA提取、逆转录及荧光定量PCR第28-30页
    2.3 结果与分析第30-35页
        2.3.1 LcMYB1在烟草叶片中瞬时表达分析第30页
        2.3.2 LcMYB1稳定遗传转化烟草的表型分析第30-33页
        2.3.3 转基因烟草花色素苷生物合成转录因子的表达分析第33页
        2.3.4 转基因烟草花色素苷生物合成结构基因的表达分析第33-35页
    2.4 讨论第35-36页
    2.5 本章小结第36-37页
第3章 荔枝果皮转录组测序与分析第37-66页
    3.1 引言第37页
    3.2 材料与方法第37-40页
        3.2.1 材料第37页
        3.2.2 类黄酮及叶绿素含量测定第37页
        3.2.3 RNA提取、文库构建及测序第37-38页
        3.2.4 Denovo组装和功能预测第38页
        3.2.5 差异表达分析第38页
        3.2.6 荧光定量PCR第38-39页
        3.2.7 系统进化树分析第39-40页
        3.2.8 在烟草叶片中瞬时表达验证LcSGR和LcPPH的功能第40页
    3.3 结果与分析第40-60页
        3.3.1 三个发育阶段荔枝果皮叶绿素和类黄酮含量第40-41页
        3.3.2 转录组组装结果分析第41-42页
        3.3.3 Unigene在数据库中的比对和功能注释第42-43页
        3.3.4 Unigene的GO功能分类第43-44页
        3.3.5 表达谱测序及分析第44-45页
        3.3.6 荔枝果皮三个发育阶段的差异基因鉴定第45-54页
        3.3.7 荔枝发育过程中果皮叶绿素降解代谢途径分析第54-56页
        3.3.8 荔枝发育过程中果皮类黄酮代谢途径分析第56-58页
        3.3.9 表达谱数据和荧光定量PCR结果的相关性分析第58页
        3.3.10 MYB基因家族分析及可能参与类黄酮生物合成的转录因子预测第58-60页
    3.4 讨论第60-65页
        3.4.1 荔枝果皮转录组组装第60-61页
        3.4.2 荔枝果皮发育相关的重要候选基因第61页
        3.4.3 SGR在荔枝果皮叶绿素降解过程中起着关键作用第61-62页
        3.4.4 参与类黄酮生物合成的结构基因第62-64页
        3.4.5 参与类黄酮生物合成的MYB转录因子第64-65页
    3.5 本章小结第65-66页
第4章 LcbHLH与LcMYB1互作调控荔枝果皮花色素苷的合成第66-89页
    4.1 引言第66页
    4.2 材料与方法第66-71页
        4.2.1 材料第66页
        4.2.2 花色素苷含量测定第66页
        4.2.3 RNA提取及cDNA的合成第66-67页
        4.2.4 基因克隆及序列分析第67页
        4.2.5 荧光定量PCR第67-68页
        4.2.6 烟草瞬时表达及稳定遗传转化第68页
        4.2.7 亚细胞定位分析第68-69页
        4.2.8 酵母双杂交实验第69-70页
        4.2.9 荧光双分子互补(BiFC)实验第70-71页
        4.2.10 双荧光报告基因实验第71页
    4.3 结果与分析第71-85页
        4.3.1 三个可能与花色素苷合成相关的b HLH转录因子的克隆和序列分析第71-75页
        4.3.2 三个LcbHLH和LcMYB1转录因子的亚细胞定位分析第75-76页
        4.3.3 LcbHLHs和LcMYB1转录因子相互作用分析第76-78页
        4.3.4 LcbHLHs转录因子在荔枝组织中的表达分析第78-82页
        4.3.5 LcbHLHs与LcMYB1转录因子在烟草叶片中瞬时表达第82页
        4.3.6 LcMYB1或/和LcbHLH3在烟草中过量表达第82-84页
        4.3.7 LcbHLH和LcMYB1与花色素苷生物合成结构基因启动子区域互作分析第84-85页
    4.4 讨论第85-88页
        4.4.1 荔枝bHLH转录因子的克隆及分析第85-86页
        4.4.2 LcbHLHs与LcMYB1互作调控花色素苷合成第86-87页
        4.4.3 LcMYB1-LcbHLH复合体通过转录激活ANS和DFR诱导花色素苷积累第87-88页
    4.5 本章小结第88-89页
第5章 LcMYB5的功能研究第89-104页
    5.1 引言第89页
    5.2 材料和方法第89-91页
        5.2.1 材料第89页
        5.2.2 花色素苷含量测定、RNA提取及cDNA合成第89页
        5.2.3 基因克隆及序列分析第89-90页
        5.2.4 农杆菌介导的烟草遗传转化第90页
        5.2.5 烟草叶片和花瓣p H测定第90页
        5.2.6 荧光定量PCR第90页
        5.2.7 亚细胞定位分析第90页
        5.2.8 酵母双杂交第90-91页
        5.2.9 荧光双分子互补(BiFC)实验第91页
        5.2.10 双荧光报告实验第91页
    5.3 结果与分析第91-101页
        5.3.1 LcMYB5的克隆及序列分析第91-93页
        5.3.2 LcMYB5在不同组织器官和发育阶段果皮中的表达分析第93-94页
        5.3.3 LcMYB5在烟草中过量表达的表型第94-96页
        5.3.4 LcMYB5在烟草中过表达对烟草內源结构和调控基因的影响第96-97页
        5.3.5 LcMYB5在烟草中过量表达对花瓣大小和组织p H的影响第97-98页
        5.3.6 LcMYB5对花色素苷合成结构基因启动子活力的影响第98页
        5.3.7 LcMYB5的亚细胞定位及与b HLH蛋白的互作分析第98-101页
    5.4 讨论第101-103页
        5.4.1 LcMYB5属于特殊的小亚组第101页
        5.4.2 LcMYB5在荔枝中组成型表达第101页
        5.4.3 LcMYB5在烟草中过量表达时表现多种功能第101-103页
        5.4.4 LcMYB5是MYB-b HLH复合体的成员之一第103页
    5.5 本章小结第103-104页
第6章 LcMYB2的功能研究第104-116页
    6.1 引言第104页
    6.2 材料与方法第104-106页
        6.2.1 材料第104页
        6.2.2 基因克隆测序及分析第104页
        6.2.3 RNA提取、逆转录及荧光定量PCR第104-105页
        6.2.4 烟草中过表达LcMYB2第105页
        6.2.5 亚细胞定位实验第105页
        6.2.6 荧光双分子互补实验第105页
        6.2.7 双荧光报告实验第105-106页
    6.3 结果与分析第106-113页
        6.3.1 LcMYB2的克隆及序列分析第106-108页
        6.3.2 LcMYB2的表达分析第108-109页
        6.3.3 转LcMYB2基因烟草表型分析第109-110页
        6.3.4 转基因烟草内源花色素苷和原花青素生物合成相关基因表达分析第110-112页
        6.3.5 LcMYB2亚细胞定位和与b HLH3相互情况分析第112-113页
        6.3.6 LcMYB2激活原花青素生物合成结构基因启动子第113页
    6.4 讨论第113-115页
        6.4.1 LcMYB2是Vv MYB5b亚组中的新成员第113-114页
        6.4.2 LcMYB2与原花青素生物合成相关基因表达模式相同第114页
        6.4.3 在烟草中过表达LcMYB2影响花药和花粉的发育第114-115页
        6.4.4 LcMYB2与LcbHLH3转录因子相互作用共同调控原花青素合成第115页
    6.5 本章小结第115-116页
第7章 全文结论、创新之处和展望第116-119页
    7.1 全文结论第116-118页
    7.2 创新之处第118页
    7.3 展望第118-119页
致谢第119-120页
参考文献第120-137页
在读期间发表论文及奖励第137页

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