| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 弧菌及弧菌病的介绍 | 第13页 |
| 1.2 养殖源弧菌耐药现状 | 第13-14页 |
| 1.3 副溶血弧菌的PFGE分型方法 | 第14-15页 |
| 1.4 整合子及ISCR1元件介导的细菌耐药 | 第15-17页 |
| 1.5 喹诺酮类耐药机制 | 第17-18页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 弧菌耐药性的调查研究 | 第20-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 常用溶液储存液及使用液的配制 | 第21-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 样品的采集及弧菌的分离、纯化、保存 | 第23-24页 |
| 2.2.2 弧菌的生化鉴定 | 第24页 |
| 2.2.3 弧菌的分子生物学（PCR）鉴定 | 第24页 |
| 2.2.4 药物敏感性实验 | 第24-26页 |
| 2.2.4.1 菌悬液的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.4.2 药物的稀释 | 第25-26页 |
| 2.2.4.3 接种与培养 | 第26页 |
| 2.2.4.4 结果的判定及统计 | 第26页 |
| 2.2.5 耐药基因的检测 | 第26-29页 |
| 2.2.5.1 试剂盒法提取弧菌基因组DNA | 第28页 |
| 2.2.5.2 耐药基因扩增体系 | 第28-29页 |
| 2.2.6 优势弧菌的PFGE分型 | 第29-30页 |
| 2.2.6.1 胶块的制备 | 第29页 |
| 2.2.6.2 细胞的裂解 | 第29-30页 |
| 2.2.6.3 洗胶块 | 第30页 |
| 2.2.6.4 胶块内DNA的酶切 | 第30页 |
| 2.2.6.5 PFGE电泳及结果分析 | 第30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-37页 |
| 2.3.1 弧菌的分离鉴定结果 | 第30-33页 |
| 2.3.2 弧菌对16种抗菌药物的敏感性测试结果 | 第33-36页 |
| 2.3.3 耐药基因的检测结果 | 第36页 |
| 2.3.4 副溶血弧菌PFGE分型结果 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-40页 |
| 2.4.1 弧菌的对16种抗菌药物的敏感性分析 | 第37-39页 |
| 2.4.2 弧菌耐药表型与耐药基因关系 | 第39-40页 |
| 第三章 整合子相关元件多重PCR检测体系的建立及其流行性分析 | 第40-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.1.1 菌株来源 | 第41页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-44页 |
| 3.2.1 细菌培养和DNA提取 | 第41-42页 |
| 3.2.2 引物设计与单引物特异性检测 | 第42页 |
| 3.2.2.1 多重PCR引物的设计 | 第42页 |
| 3.2.2.2 单引物特异性检测 | 第42页 |
| 3.2.3 多重PCR反应体系的建立及优化 | 第42-43页 |
| 3.2.3.1 多重PCR反应体系的建立 | 第42-43页 |
| 3.2.3.2 多重PCR体系引物体积组合的优化 | 第43页 |
| 3.2.3.3 退火温度的优化 | 第43页 |
| 3.2.4 多重PCR体系的灵敏度检测 | 第43页 |
| 3.2.5 多重PCR体系的应用 | 第43-44页 |
| 3.2.6 int1及ISCR1阳性株可变区扩增 | 第44页 |
| 3.3 结果 | 第44-48页 |
| 3.3.1 单引物特异性检测结果 | 第44-45页 |
| 3.3.2 多重PCR反应体系的建立与优化 | 第45页 |
| 3.3.3 多重PCR体系的灵敏度分析 | 第45页 |
| 3.3.4 多重PCR检测方法在弧菌整合子流行性调查中的应用 | 第45-46页 |
| 3.3.5 int1、ISCR1阳性株携带基因盒 | 第46-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-51页 |
| 第四章 qnrVC基因在弧菌中的流行及耐药性研究 | 第51-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第51页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-53页 |
| 4.2.1 药物敏感性实验 | 第52页 |
| 4.2.2 qnrVC基因检测 | 第52-53页 |
| 4.2.3 接合转移试验 | 第53页 |
| 4.2.4 脉冲场凝胶电泳（PFGE） | 第53页 |
| 4.3 结果 | 第53-58页 |
| 4.3.1 弧菌对喹诺酮药物的耐药情况 | 第53-54页 |
| 4.3.2 qnrVC基因在弧菌中的检出情况及序列分析 | 第54-56页 |
| 4.3.3 qnrVC基因携带情况与喹诺酮类药物耐药性的关系 | 第56页 |
| 4.3.4 接合转移试验结果 | 第56-57页 |
| 4.3.5 PFGE分型结果 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-60页 |
| 小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
