| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 两栖类免疫系统研究和Toll样受体家族基因 | 第13-16页 |
| 1.1 两栖类免疫系统研究 | 第13-14页 |
| 1.2 Toll样受体家族基因 | 第14-16页 |
| 1.2.1 Toll样受体的发现 | 第14页 |
| 1.2.2 Toll样受体的分类与配体 | 第14-15页 |
| 1.2.3 Toll样受体介导的信号传导通路 | 第15-16页 |
| 2 TLR7基因的研究进展 | 第16-20页 |
| 2.1 TLR7的发现与分布 | 第16-17页 |
| 2.2 TLR7与配体及信号转导途径 | 第17-18页 |
| 2.2.1 TLR7配体 | 第17页 |
| 2.2.2 TLR7信号转导途径 | 第17-18页 |
| 2.3 TLR7的生物学功能 | 第18-20页 |
| 2.3.1 TLR7介导抗病毒效应 | 第18-19页 |
| 2.3.2 TLR7与自身免疫疾病 | 第19页 |
| 2.3.3 TLR7在抗肿瘤研究中的作用 | 第19-20页 |
| 2.3.4 TLR7可以介导凋亡 | 第20页 |
| 3 髓样分化因子88基因(MyD88)及其研究进展 | 第20-23页 |
| 3.1 MyD88基因的发现和分布 | 第20-21页 |
| 3.1.1 MyD88基因的发现 | 第20-21页 |
| 3.1.2 分布 | 第21页 |
| 3.2 MyD88介导的信号传导 | 第21-22页 |
| 3.2.1 IL-1Rs受体家族的信号传导 | 第21-22页 |
| 3.2.2 Toll/TLR家族的信号转导 | 第22页 |
| 3.2.3 IFN-γ-R信号传导途径 | 第22页 |
| 3.3 MyD88的生物学功能 | 第22-23页 |
| 3.3.1 信号通路的转接蛋白 | 第22页 |
| 3.3.2 MyD88参与多种疾病的发生 | 第22-23页 |
| 4 中国大鲵及其病害 | 第23-24页 |
| 5 研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 大鲵TLR7和MyD88基因的克隆与生物学信息分析 | 第25-44页 |
| 1 材料与方法 | 第26-34页 |
| 1.1 材料 | 第26-28页 |
| 1.1.1 实验动物、菌种和质粒 | 第26页 |
| 1.1.2 主要试剂和耗材 | 第26-27页 |
| 1.1.3 主要实验仪器 | 第27-28页 |
| 1.2 实验方法 | 第28-34页 |
| 1.2.1 大鲵肾脏组织总RNA的提取 | 第28页 |
| 1.2.2 5'-RACE和3'-RACE末端cDNA合成 | 第28-29页 |
| 1.2.3 设计简并引物扩增MyD88中间序列序列 | 第29-30页 |
| 1.2.4 扩增中间序列 | 第30页 |
| 1.2.5 RACE法扩增大鲵TLR7和MyD88基因cDNA全长 | 第30-31页 |
| 1.2.6 目的片段回收 | 第31-32页 |
| 1.2.7 连接与转化 | 第32页 |
| 1.2.8 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第32-33页 |
| 1.2.9 生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 2 实验结果 | 第34-42页 |
| 2.1 大鲵TLR7(CgsTLR7)和MyD88(CgsMyD88)的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第34-37页 |
| 2.2 CgsTLR7和CgsMyD88氨基酸多序列比对分析 | 第37-41页 |
| 2.3 CgsTLR7和CgsMyD88氨基酸进化树分析 | 第41-42页 |
| 2.3.1 CgsTLR7进化树分析 | 第41页 |
| 2.3.2 CgsMyD88氨基酸进化树分析 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 大鲵TLR7和MyD88基因的组织表达和诱导表达分布 | 第44-54页 |
| 1 材料和方法 | 第44-48页 |
| 1.1 材料 | 第44-46页 |
| 1.1.1 实验材料、细胞和病毒 | 第44-45页 |
| 1.1.2 实验试剂和耗材 | 第45页 |
| 1.1.3 主要实验仪器 | 第45-46页 |
| 1.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 1.2.1 病毒培养与滴度测定 | 第46页 |
| 1.2.2 病毒滴度测定 | 第46-47页 |
| 1.2.3 各组织RNA的提取和cDNA合成 | 第47页 |
| 1.2.4 荧光定量PCR检测CgsTLR7和CgsMyD88在各组织中的分布 | 第47-48页 |
| 1.2.5 GSIV感染后CgsTLR7和CgsMyD88基因表达特征 | 第48页 |
| 1.2.6 数据分析 | 第48页 |
| 2 实验结果 | 第48-52页 |
| 2.1 荧光定量检测CgsTLR7和CgsMyD88在大鲵各组织表达分布 | 第48-50页 |
| 2.2 GSIV感染后大鲵CgsTLR7和CgsMyD88在大鲵脾、肾组织的表达特征 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 大鲵MyD88基因真核表达载体的构建及功能研究 | 第54-68页 |
| 1 材料与方法 | 第54-62页 |
| 1.1 材料 | 第54-56页 |
| 1.1.1 细胞和病毒 | 第54页 |
| 1.1.2 实验试剂和耗材 | 第54-55页 |
| 1.1.3 实验仪器和设备 | 第55-56页 |
| 1.2 实验方法 | 第56-62页 |
| 1.2.1 真核表达质粒pCDNA3.1(+)-MyD88载体的构建 | 第56-60页 |
| 1.2.1.1 CgsMyD88ORF片段扩增 | 第56-57页 |
| 1.2.1.2 pMD19-T-MyD88质粒的提取 | 第57-58页 |
| 1.2.1.3 目的基因MyD88、pcDNA3.1(+)的双酶切 | 第58页 |
| 1.2.1.4 转染用pcDNA3.1(+)-MyD88质粒的制备 | 第58-60页 |
| 1.2.2 CgsMyD88蛋白在GS-M细胞中的定位 | 第60-61页 |
| 1.2.2.1 pcDNA3.1(+)-MyD88转染GS-M细胞 | 第60页 |
| 1.2.2.2 间接荧光免疫检测GS-M细胞中MyD88蛋白的表达 | 第60-61页 |
| 1.2.3 NF-κB荧光素酶报告基因分析 | 第61-62页 |
| 1.2.3.1 质粒转染GS-M细胞 | 第61页 |
| 1.2.3.2 荧光素酶活性的测定 | 第61-62页 |
| 2 实验结果 | 第62-66页 |
| 2.1 pcDNA3.1(+)-MyD88表达质粒的构建 | 第62-65页 |
| 2.1.1 CgsMyD88基因ORF的扩增 | 第62-63页 |
| 2.1.2 阳性克隆的筛选 | 第63-64页 |
| 2.1.3 pcDNA3.1(+)-MyD88的酶切与鉴定 | 第64-65页 |
| 2.2 CgsMyD88蛋白在GS-M细胞中的定位 | 第65-66页 |
| 2.3 CgsMyD88激活转录因子NF-κB | 第66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 附录一 | 第78-80页 |
| 附录二 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
