| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一部分 绪论 | 第13-16页 |
| 1.1 骨折愈合 | 第13页 |
| 1.2 Wnt/β-catenin信号通路 | 第13-14页 |
| 1.3 基因转染技术治疗骨折 | 第14-16页 |
| 第二部分 激活Wnt /β-catenin信号通路对骨愈合的影响 | 第16-40页 |
| 2.1 引言 | 第16-17页 |
| 2.2 实验仪器与试剂 | 第17-19页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.2.2 主要试剂和抗体 | 第18-19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-27页 |
| 2.3.1 实验动物 | 第19页 |
| 2.3.2 骨折模型 | 第19-20页 |
| 2.3.3 治疗方案 | 第20-21页 |
| 2.3.4 HE染色 | 第21-23页 |
| 1) 骨痂组织标本脱钙 | 第21-22页 |
| 2) 石蜡切片主要步骤 | 第22页 |
| 3) 染色主要步骤 | 第22-23页 |
| 2.3.5 石蜡切片免疫组化染色步骤 | 第23-24页 |
| 2.3.6 Western blotting主要步骤 | 第24-25页 |
| 2.3.7 X线检查 | 第25页 |
| 2.3.8 Micro-CT扫描 | 第25-26页 |
| 2.3.9 生物力学测试 | 第26页 |
| 2.3.10 统计软件和统计方法 | 第26-27页 |
| 2.4 实验结果 | 第27-37页 |
| 2.4.1 动物 | 第27页 |
| 2.4.2 SB-415286促进 β-catenin、PCNA、BMP-2 的表达 | 第27-29页 |
| 2.4.3 SB-415286促进了成骨细胞增殖和成骨作用 | 第29-32页 |
| 2.4.4 SB-415286抑制GSK-3β 活性促进骨折愈合 | 第32-34页 |
| 2.4.5 SB-415286促进骨痂骨量和骨密度 | 第34-35页 |
| 2.4.6 SB-415286提高了骨痂的生物力学性质 | 第35-37页 |
| 2.5 讨论 | 第37-40页 |
| 第三部分 慢病毒介导过表达miR-199a基因促进萎缩性骨不连愈合 | 第40-79页 |
| 3.1 引言 | 第40-43页 |
| 3.2 慢病毒载体 | 第43-59页 |
| 3.2.1 慢病毒载体的制备 | 第43-47页 |
| 3.2.2 慢病毒包装操作步骤 | 第47-49页 |
| 3.2.3 慢病毒滴度检测 | 第49-52页 |
| 3.2.4 慢病毒转染预实验操作 | 第52-59页 |
| 3.3 动物试验 | 第59-64页 |
| 3.3.1 实验动物 | 第59页 |
| 3.3.2 萎缩性骨不连模型制作 | 第59页 |
| 3.3.3 体内治疗方案 | 第59-60页 |
| 3.3.4 标本的收集 | 第60页 |
| 3.3.5 组织学检测 | 第60-61页 |
| 3.3.6 聚合酶链式反应技术 | 第61-63页 |
| 3.3.7 免疫组化 | 第63页 |
| 3.3.8 X线检查 | 第63页 |
| 3.3.9 Micro-CT | 第63-64页 |
| 3.3.10 统计分析 | 第64页 |
| 3.4 动物实验结果 | 第64-73页 |
| 3.4.1 动物观察 | 第64页 |
| 3.4.2 过表达miR-199a基因促进了 β-catenin mRNA的表达 | 第64-65页 |
| 3.4.3 过表达miR-199a基因促进了骨痂内 β-catenin、PCNA和BMP-2 的表达 | 第65-69页 |
| 3.4.4 过表达miR-199a促进萎缩性骨不连愈合 | 第69-71页 |
| 3.4.5 过表达miR-199a促进骨痂矿化 | 第71-73页 |
| 3.5 讨论 | 第73-79页 |
| 3.5.1 萎缩性骨不连 | 第73页 |
| 3.5.2 慢病毒载体介导的基因转染技术 | 第73-75页 |
| 3.5.3 LV-miR-199a促进萎缩性骨不连的愈合 | 第75-77页 |
| 3.5.4 慢病毒介导治疗可能存在的缺点 | 第77-79页 |
| 第四部分 慢病毒介导过表达miR-199a基因治疗骨质疏松症 | 第79-90页 |
| 4.1 引言 | 第79-82页 |
| 4.2 材料、试剂与实验设备 | 第82页 |
| 4.3 实验方法 | 第82-84页 |
| 4.3.1 慢病毒载体 | 第82页 |
| 4.3.2 实验动物 | 第82页 |
| 4.3.3 骨质疏松症模型制作 | 第82页 |
| 4.3.4 在体内的治疗方案 | 第82-83页 |
| 4.3.5 Micro-CT扫描 | 第83页 |
| 4.3.6 生物力学实验 | 第83-84页 |
| 4.4 实验结果 | 第84-87页 |
| 4.4.1 Micro-CT | 第84-86页 |
| 4.4.2 四点弯曲试验 | 第86-87页 |
| 4.5 讨论 | 第87-90页 |
| 第五部分 拮抗Wnt信号通路中的Sclerostin靶点促进开放性骨折愈合 | 第90-112页 |
| 5.1 引言 | 第90-91页 |
| 5.2 实验方法 | 第91-95页 |
| 5.2.1 实验动物 | 第91-92页 |
| 5.2.2 大鼠股骨中段开放性骨折模型的建立 | 第92页 |
| 5.2.3 治疗方案 | 第92-94页 |
| 5.2.4 组织学（包括免疫组化） | 第94页 |
| 5.2.5 Western blotting | 第94页 |
| 5.2.6 X射线 | 第94页 |
| 5.2.7 Micro-CT扫描 | 第94页 |
| 5.2.8 生物力学测试 | 第94页 |
| 5.2.9 统计学分析 | 第94-95页 |
| 5.3 结果 | 第95-107页 |
| 5.3.1 大体观察 | 第95页 |
| 5.3.2 Scl-Ab治疗增加骨痂组织内PCNA和BMP-2 的表达 | 第95-100页 |
| 5.3.3 Scl-Ab治疗加速骨折愈合 | 第100-103页 |
| 5.3.4 Scl-Ab增加骨痂组织的骨量和生物力学特性 | 第103-106页 |
| 5.3.5 Scl-Ab增加了左侧完整股骨的合成代谢 | 第106-107页 |
| 5.4 讨论 | 第107-112页 |
| 5.4.1 Sclerostin抗体促进开放性骨折愈合 | 第107-109页 |
| 5.4.2 Sclerostin抗体的优势 | 第109-112页 |
| 1) 口服GSK-3β 抑制剂激活Wnt信号途径的潜在风险 | 第109-110页 |
| 2) 慢病毒转染激活Wnt信号途径的潜在风险 | 第110页 |
| 3) Sclerostin抗体存在明显的优势 | 第110-112页 |
| 全文小结 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| 攻读博士学位期间已发表的学术论文 | 第134页 |
