| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 中英文缩略词表 | 第9-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 第一章 布鲁菌对RAW264.7 细胞内AMPK/p70s6k信号通路的激活 | 第16-35页 |
| 材料与方法 | 第16-26页 |
| 1 材料 | 第16-21页 |
| 1.1 菌株与细胞 | 第16-17页 |
| 1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 1.3 主要仪器 | 第17-18页 |
| 1.4 培养基 | 第18页 |
| 1.5 溶液配制 | 第18-21页 |
| 2 方法 | 第21-26页 |
| 2.1 小鼠巨噬细胞RAW264.7 的培养 | 第21-22页 |
| 2.2 羊种布鲁菌 16M的培养及PCR鉴定 | 第22-23页 |
| 2.3 16M侵染RAW264.7 细胞 | 第23页 |
| 2.4 细胞总蛋白质的提取 | 第23-24页 |
| 2.5 BCA法蛋白浓度测定 | 第24页 |
| 2.6 Western Blot具体步骤 | 第24-25页 |
| 2.7 MTT实验 | 第25页 |
| 2.8 统计学分析 | 第25-26页 |
| 结果 | 第26-33页 |
| 3.1 小鼠巨噬细胞RAW264.7 的培养 | 第26页 |
| 3.2 羊种布鲁菌 16M菌株PCR鉴定 | 第26-27页 |
| 3.3 BCA蛋白浓度的测定 | 第27-28页 |
| 3.4 羊种布鲁菌 16M对AMPK/p70s6k信号通路的激活 | 第28-29页 |
| 3.5 抑制剂Compound C对RAW264.7 细胞活性的影响 | 第29-31页 |
| 3.6 抑制剂 Compound C 对 16M 介导的 AMPK/p70s6k 信号通路的阻断 | 第31-33页 |
| 讨论 | 第33-35页 |
| 第二章 阻断AMPK/p70s6k信号通路对羊种布鲁菌 16M介导细胞自噬的影响 | 第35-56页 |
| 材料与方法 | 第35-42页 |
| 1 材料 | 第35-37页 |
| 1.1 菌株与细胞 | 第35页 |
| 1.2 主要试剂 | 第35-36页 |
| 1.3 主要仪器 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-42页 |
| 2.1 小鼠巨噬细胞的培养 | 第37页 |
| 2.2 布鲁菌的培养 | 第37页 |
| 2.3 CFU计数 | 第37-38页 |
| 2.4 q RT-PCR检测抑制剂Compound C阻断AMPK/p70s6k信号通路后对自噬相关基因m RNA表达量的影响 | 第38-40页 |
| 2.5 Western blot检测自噬相关蛋白的表达 | 第40-41页 |
| 2.6 统计学分析 | 第41-42页 |
| 结果 | 第42-51页 |
| 3.1 抑制剂Compound C对 16M在RAW264.7 胞内存活的影响 | 第42-43页 |
| 3.2 阻断AMPK/p70s6k信号通路对自噬相关基因m RNA水平的影响 | 第43-46页 |
| 3.3 16M侵染RAW264.7 细胞后自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I、Beclin1和ULK1的表达 | 第46-48页 |
| 3.4 阻断AMPK/p70s6k信号通路对自噬相关基因蛋白水平的影响 | 第48-51页 |
| 讨论 | 第51-56页 |
| 4.1 细胞自噬的简介 | 第51-52页 |
| 4.2 布鲁菌感染与细胞自噬 | 第52-53页 |
| 4.3 自噬相关蛋白LC3、Beclin1和ULK1 | 第53-54页 |
| 4.4 AMPK/p70s6k信号通路与细胞自噬 | 第54-56页 |
| 第三章 AMPK在 16M介导RAW264.7 细胞自噬过程中作用的研究 | 第56-78页 |
| 材料与方法 | 第56-63页 |
| 1 材料 | 第56-58页 |
| 1.1 菌株与细胞 | 第56-57页 |
| 1.2 主要试剂 | 第57-58页 |
| 1.3 主要仪器 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-63页 |
| 2.1 小鼠巨噬细胞RAW264.7 的培养 | 第58页 |
| 2.2 布鲁菌的培养 | 第58-59页 |
| 2.3 si RNA的设计 | 第59页 |
| 2.4 AMPKα2-si RNA片段的转染浓度和转染试剂si RNA-mate用量的筛选 | 第59-60页 |
| 2.5 si RNA的干扰效率的检测 | 第60-61页 |
| 2.6 Western blot检测沉默AMPKα2 基因后AMPK蛋白的表达情况 | 第61页 |
| 2.7 沉默AMPKα2 基因后RAW264.7 细胞内 16M的存活能力 | 第61-62页 |
| 2.8 蛋白的提取 | 第62页 |
| 2.9 Western blot分析 | 第62页 |
| 2.10 统计学分析 | 第62-63页 |
| 结果 | 第63-75页 |
| 3.1 倒置荧光显微镜下观察si RNA转染情况 | 第63-64页 |
| 3.2 q RT-PCR检测干扰片段抑制效果 | 第64-65页 |
| 3.3 Western blot检测干扰片段的干扰效果 | 第65-67页 |
| 3.4 沉默AMPKα2 基因对RAW264.7 细胞活性的影响 | 第67-68页 |
| 3.5 沉默AMPKα2 基因对 16M激活AMPK/p70s6k信号通路的影响 | 第68-70页 |
| 3.6 沉默AMPKα2 基因对 16M在RAW264.7 细胞内存活的影响 | 第70-71页 |
| 3.7 沉默AMPKα2 基因对 16M自噬相关基因表达的影响 | 第71-72页 |
| 3.8 沉默AMPKα2 基因对 16M介导自噬相关蛋白表达的影响 | 第72-75页 |
| 讨论 | 第75-78页 |
| 4.1 RNA干扰的实验原理 | 第75-76页 |
| 4.2 AMPK的功能 | 第76-78页 |
| 全文总结 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 文献综述 | 第84-96页 |
| 参考文献 | 第92-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 作者简介 | 第97-98页 |
| 导师评阅表 | 第98页 |
