| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 骨和软骨的形成 | 第12-13页 |
| 1.1.1 骨的形成 | 第12页 |
| 1.1.2 软骨与软骨形成 | 第12-13页 |
| 1.1.3 软骨细胞 | 第13页 |
| 1.2 ATDC5细胞 | 第13-14页 |
| 1.3 瘦素 | 第14-16页 |
| 1.3.1 瘦素的来源 | 第14页 |
| 1.3.2 瘦素抵抗 | 第14-15页 |
| 1.3.3 瘦素的功能 | 第15页 |
| 1.3.4 瘦素信号 | 第15-16页 |
| 1.4 瘦素的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4.1 瘦素与肥胖 | 第16页 |
| 1.4.2 瘦素对骨的影响 | 第16-18页 |
| 1.4.3 瘦素在其他方面的作用 | 第18页 |
| 1.5 试验的目的和意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-29页 |
| 2.1 实验仪器与试剂 | 第20-21页 |
| 2.2 主要试剂的配制 | 第21-22页 |
| 2.3 ATDC5细胞培养与处理 | 第22页 |
| 2.3.1 ATDC5细胞复苏 | 第22页 |
| 2.3.2 细胞计数 | 第22页 |
| 2.3.3 细胞处理 | 第22页 |
| 2.4 CCK8检测细胞活性变化 | 第22-23页 |
| 2.5 细胞染色 | 第23页 |
| 2.5.1 蛋白多糖检验：阿利新蓝染色 | 第23页 |
| 2.5.2 钙化检测：茜红染色 | 第23页 |
| 2.6 碱性磷酸酶活性检测 | 第23-24页 |
| 2.6.1 配液 | 第23-24页 |
| 2.6.2 标准曲线的绘制 | 第24页 |
| 2.6.3 检测方法 | 第24页 |
| 2.7 总RNA的提取与RT-PCR反应 | 第24-26页 |
| 2.7.1 引物的设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.7.2 总RNA提取与反转录 | 第25页 |
| 2.7.3 逆转录反应 | 第25-26页 |
| 2.7.4 荧光定量PCR反应 | 第26页 |
| 2.7.5 PCR产物电泳 | 第26页 |
| 2.8 Western Blot | 第26-28页 |
| 2.8.1 细胞中总蛋白的提取及浓度测定 | 第26-27页 |
| 2.8.2 蛋白样品的处理 | 第27页 |
| 2.8.3 Western blot检测目的蛋白 | 第27-28页 |
| 2.9 统计分析方法 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-39页 |
| 3.1 CCK8检测结果 | 第29页 |
| 3.2 RNA浓度、完整性检测结果 | 第29-30页 |
| 3.3 细胞染色结果 | 第30页 |
| 3.4 瘦素对ALP活性的影响 | 第30-31页 |
| 3.5 瘦素对Sox9的影响 | 第31-33页 |
| 3.5.1 瘦素对Sox9基因表达量的影响 | 第31-32页 |
| 3.5.2 瘦素对Sox9蛋白表达的影响 | 第32-33页 |
| 3.6 瘦素对Ⅱ型胶原的影响 | 第33-34页 |
| 3.7 瘦素对Aggrecan的影响 | 第34-36页 |
| 3.7.1 瘦素对Aggrecan基因表达的影响 | 第34-35页 |
| 3.7.2 瘦素对Aggrecan蛋白表达量的影响 | 第35-36页 |
| 3.8 瘦素对Ⅹ型胶原的影响 | 第36-39页 |
| 3.8.1 瘦素对Ⅹ型胶原基因表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.8.2 瘦素对Ⅹ型胶原蛋白表达量的影响 | 第37-39页 |
| 4 讨论 | 第39-44页 |
| 4.1 瘦素对Sox9表达的影响 | 第39-40页 |
| 4.2 瘦素对Aggrecan的影响 | 第40-41页 |
| 4.3 瘦素对Ⅱ型胶原的影响 | 第41页 |
| 4.4 瘦素对Ⅹ型胶原的影响 | 第41-42页 |
| 4.5 瘦素对ALP活性的影响 | 第42-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第53页 |