玉米抗冷基因ZmGDH2的功能分析及遗传转化的研究
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩写词 | 第9-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1.1 冷胁迫是影响作物产量的最重要因素之一 | 第14-15页 |
| 1.1.1 低温对玉米生长的影响 | 第14-15页 |
| 1.1.2 苗期冷害对吉林省玉米生产的影响 | 第15页 |
| 1.2 低温调节基因表达信号网络 | 第15-18页 |
| 1.2.1 冷信号 | 第15-16页 |
| 1.2.2 冷信号转录调节 | 第16-18页 |
| 1.3 蛋白质组学在低温胁迫下的应用 | 第18-19页 |
| 1.4 谷氨酸脱氢酶（GDH）的研究 | 第19-22页 |
| 1.4.1 GDH在碳氮代谢中的作用 | 第19-20页 |
| 1.4.2 GDH在逆境条件下的作用 | 第20-21页 |
| 1.4.3 GDH转基因植物的研究现状 | 第21-22页 |
| 1.5 转基因技术与传统育种的区别 | 第22-23页 |
| 1.5.1 涵义不同 | 第22-23页 |
| 1.5.2 基因转移的范围和效率不同 | 第23页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第2章 ZmGDH2基因的克隆及表达分析 | 第25-39页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-32页 |
| 2.1.1 实验菌种与载体 | 第25-26页 |
| 2.1.2 试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 培养基配方 | 第26页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.5 植物材料及培养条件 | 第27页 |
| 2.1.6 总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.1.7 cDNA的合成 | 第28页 |
| 2.1.8 引物设计 | 第28-29页 |
| 2.1.9 目的基因的克隆 | 第29页 |
| 2.1.10 目的片段的回收 | 第29-30页 |
| 2.1.11 回收产物的平末端加A | 第30页 |
| 2.1.12 目的片段与T载体的连接 | 第30-31页 |
| 2.1.13 连接产物转化大肠杆菌 | 第31页 |
| 2.1.14 菌液检测 | 第31页 |
| 2.1.15 测序 | 第31-32页 |
| 2.1.16 qRT-PCR检测 | 第32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.2.1 ZmGDH2基因的克隆 | 第32-33页 |
| 2.2.2 生物信息学分析 | 第33-36页 |
| 2.2.3 ZmGDH2表达量分析 | 第36-38页 |
| 2.3 讨论 | 第38页 |
| 2.4 小结 | 第38-39页 |
| 第3章 ZmGDH2基因表达载体的构建和功能分析 | 第39-53页 |
| 3.1 材料和方法 | 第39-46页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第39页 |
| 3.1.2 生长条件 | 第39页 |
| 3.1.3 所需试剂、及培养基及所用仪器 | 第39页 |
| 3.1.4 质粒的提取 | 第39-40页 |
| 3.1.5 酶切 | 第40页 |
| 3.1.6 连接表达载体 | 第40页 |
| 3.1.7 农杆菌的转化 | 第40-41页 |
| 3.1.8 重测序 | 第41页 |
| 3.1.9 拟南芥的转化 | 第41-42页 |
| 3.1.10 抗性拟南芥筛选 | 第42页 |
| 3.1.11 CTAB法提取DNA | 第42页 |
| 3.1.12 PCR检测 | 第42页 |
| 3.1.13 RT-PCR检测 | 第42-43页 |
| 3.1.14 突变体纯合性检测 | 第43-44页 |
| 3.1.15 生理生化指标测定 | 第44-46页 |
| 3.2 结果与分析 | 第46-51页 |
| 3.2.1 ZmGDH2过表达载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.2.2 抗性拟南芥的筛选 | 第47页 |
| 3.2.3 转基因拟南芥的分子检测 | 第47-49页 |
| 3.2.4 突变体纯合性检测 | 第49页 |
| 3.2.5 ZmGDH2过表达植株抗冻分析 | 第49-50页 |
| 3.2.7 生理生化指标测定 | 第50-51页 |
| 3.3 讨论 | 第51-52页 |
| 3.4 小结 | 第52-53页 |
| 第4章 ZmGDH2基因在玉米中的遗传转化研究 | 第53-65页 |
| 4.1 材料与方法 | 第53-56页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第53页 |
| 4.1.2 实验菌种与载体 | 第53页 |
| 4.1.3 实验试剂和仪器 | 第53页 |
| 4.1.4 实验所需培养基 | 第53-54页 |
| 4.1.5 幼胚的获取 | 第54页 |
| 4.1.6 体细胞胚胎的诱导 | 第54页 |
| 4.1.7 农杆菌介导转化玉米幼胚 | 第54-55页 |
| 4.1.8 农杆菌介导转化玉米体细胞胚胎 | 第55页 |
| 4.1.9 分子检测 | 第55-56页 |
| 4.2 结果与分析 | 第56-62页 |
| 4.2.1 农杆菌介导玉米幼胚的遗传转化 | 第56-57页 |
| 4.2.2 农杆菌介导愈伤组织的遗传转化 | 第57-59页 |
| 4.2.3 遗传体系的优化 | 第59-61页 |
| 4.2.4 转化植株分子检测 | 第61页 |
| 4.2.5 转化植株的qRT-PCR检测 | 第61-62页 |
| 4.2.6 转基因种子的获得 | 第62页 |
| 4.3 讨论 | 第62-64页 |
| 4.3.1 农杆菌菌种对遗传转化的影响 | 第63页 |
| 4.3.2 菌液OD、侵染时间对遗传转化的影响。 | 第63-64页 |
| 4.3.3 葡萄糖对转化率的影响 | 第64页 |
| 4.3.4 热激对转化率的影响 | 第64页 |
| 4.4 小结 | 第64-65页 |
| 第5章 花粉管通道法转化玉米的研究 | 第65-71页 |
| 5.1 材料和方法 | 第65-66页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第65页 |
| 5.1.2 实验菌种和载体 | 第65页 |
| 5.1.3 实验药品及仪器 | 第65页 |
| 5.1.4 重组质粒DNA的制备 | 第65-66页 |
| 5.1.5 重组质粒的导入 | 第66页 |
| 5.1.6 T0代植株的筛选 | 第66页 |
| 5.2 结果与分析 | 第66-69页 |
| 5.2.1 转化植株的Basta抗性筛选 | 第66-67页 |
| 5.2.2 转化植株分子检测 | 第67-68页 |
| 5.2.3 转基因材料的获得 | 第68-69页 |
| 5.3 讨论 | 第69-70页 |
| 5.4 小结 | 第70-71页 |
| 第6章 全文结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 作者简介及科研成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
