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表达猪流行性腹泻病毒COE蛋白的重组脑心肌炎病毒的构建

摘要第6-7页
Abstract第7-8页
第一章 引言第15-24页
    1.1 PEDV病原学与流行病学研究进展第15-19页
        1.1.1 概述第15页
        1.1.2 一般生物学特性第15-16页
        1.1.3 PEDV的分类地位第16页
        1.1.4 主要基因、编码的蛋白及其功能第16-18页
        1.1.5 流行特点第18-19页
        1.1.6 疫苗第19页
    1.2 EMCV病原学与流行病学研究进展第19-22页
        1.2.1 概述第19-20页
        1.2.2 分类地位第20页
        1.2.3 主要基因、编码蛋白及其功能第20-21页
        1.2.4 流行特点第21-22页
        1.2.5 临床症状第22页
        1.2.6 疫苗第22页
    1.3 RNA病毒反向遗传学第22-23页
        1.3.1 正链RNA病毒的反向遗传学第22-23页
        1.3.2 负链RNA病毒的反向遗传学第23页
        1.3.3 双链RNA病毒的反向遗传学第23页
    1.4 研究的目的及意义第23-24页
第二章 EMCV感染性克隆的构建第24-41页
    2.1 材料第24页
        2.1.1 毒株、细胞、质粒和实验动物第24页
        2.1.2 主要试剂和仪器第24页
    2.2 方法第24-32页
        2.2.1 引物设计第24-25页
        2.2.2 EMCV的培养及TCID_(50)的测定第25-26页
        2.2.3 EMCV核酸的提取及鉴定第26页
        2.2.4 EMCV cDNA全长感染性克隆的构建第26-27页
        2.2.5 EMCV cDNA全长的扩增第27-28页
        2.2.6 EMCV cDNA克隆至载体第28-29页
        2.2.7 EMCV cDNA全长克隆的体外转录第29-30页
        2.2.8 病毒的拯救第30页
        2.2.9 拯救病毒的鉴定第30-32页
        2.2.10 拯救病毒一步生长曲线的测定第32页
        2.2.11 拯救病毒攻毒小鼠半数致死量的测定第32页
        2.2.12 拯救病毒在攻毒小鼠脏器中的病毒载量分析第32页
    2.3 结果第32-39页
        2.3.1 EMCV的增殖培养第32-33页
        2.3.2 RT-PCR鉴定EMCV第33页
        2.3.3 EMCV cDNA全长的RT-PCR扩增第33-34页
        2.3.4 EMCV cDNA全长重组载体的构建与鉴定第34-35页
        2.3.5 体外转录及病毒拯救第35页
        2.3.6 拯救病毒的鉴定第35-37页
        2.3.7 一步生长曲线的测定第37页
        2.3.8 拯救病毒攻毒小鼠半数致死量的测定第37-38页
        2.3.9 拯救病毒在攻毒小鼠脏器中的分布与载量第38-39页
    2.4 讨论第39-41页
第三章 表达PEDV COE蛋白的重组脑心肌炎病毒的构建第41-62页
    3.1 材料第41页
        3.1.1 毒株、细胞和实验动物第41页
        3.1.2 主要试剂第41页
    3.2 方法第41-49页
        3.2.1 COE基因重组EMCV载体的构建策略第41-42页
        3.2.2 引物设计第42-43页
        3.2.3 PEDV RNA的提取及cDNA的准备第43页
        3.2.4 COE基因重组EMCV载体的构建第43-45页
        3.2.5 重组载体的体外转录第45-46页
        3.2.6 重组病毒的拯救第46页
        3.2.7 重组病毒的鉴定第46-47页
        3.2.8 重组病毒一步生长曲线的测定第47页
        3.2.9 重组病毒攻毒小鼠的半数致死量测定第47-48页
        3.2.10 重组病毒在攻毒小鼠脏器中病毒载量分析第48页
        3.2.11 重组病毒攻毒小鼠的组织病理学变化第48页
        3.2.12 重组病毒攻毒小鼠后产生抗体的ELISA检测第48-49页
    3.3 结果第49-60页
        3.3.1 PEDV COE基因的RT-PCR扩增第49页
        3.3.2 重组片段的RT-PCR扩增第49-52页
        3.3.3 COE基因重组EMCV载体的酶切鉴定第52页
        3.3.4 COE基因重组EMCV载体的测序鉴定第52-53页
        3.3.5 重组病毒的体外转录及拯救第53页
        3.3.6 重组病毒的鉴定第53-57页
        3.3.7 重组病毒一步生长曲线的测定第57页
        3.3.8 重组病毒攻毒小鼠半数致死量的测定第57-58页
        3.3.9 重组病毒在攻毒小鼠脏器的病毒载量分析第58页
        3.3.10 重组病毒攻毒小鼠脏器的病理组织变化第58-59页
        3.3.11 重组病毒攻毒小鼠抗体的ELISA检测结果第59-60页
    3.4 讨论第60-62页
第四章 全文结论第62-63页
参考文献第63-70页
致谢第70-71页
作者简历第71页

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