| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第15-24页 |
| 1.1 PEDV病原学与流行病学研究进展 | 第15-19页 |
| 1.1.1 概述 | 第15页 |
| 1.1.2 一般生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.1.3 PEDV的分类地位 | 第16页 |
| 1.1.4 主要基因、编码的蛋白及其功能 | 第16-18页 |
| 1.1.5 流行特点 | 第18-19页 |
| 1.1.6 疫苗 | 第19页 |
| 1.2 EMCV病原学与流行病学研究进展 | 第19-22页 |
| 1.2.1 概述 | 第19-20页 |
| 1.2.2 分类地位 | 第20页 |
| 1.2.3 主要基因、编码蛋白及其功能 | 第20-21页 |
| 1.2.4 流行特点 | 第21-22页 |
| 1.2.5 临床症状 | 第22页 |
| 1.2.6 疫苗 | 第22页 |
| 1.3 RNA病毒反向遗传学 | 第22-23页 |
| 1.3.1 正链RNA病毒的反向遗传学 | 第22-23页 |
| 1.3.2 负链RNA病毒的反向遗传学 | 第23页 |
| 1.3.3 双链RNA病毒的反向遗传学 | 第23页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 EMCV感染性克隆的构建 | 第24-41页 |
| 2.1 材料 | 第24页 |
| 2.1.1 毒株、细胞、质粒和实验动物 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第24-25页 |
| 2.2.2 EMCV的培养及TCID_(50)的测定 | 第25-26页 |
| 2.2.3 EMCV核酸的提取及鉴定 | 第26页 |
| 2.2.4 EMCV cDNA全长感染性克隆的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.5 EMCV cDNA全长的扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.6 EMCV cDNA克隆至载体 | 第28-29页 |
| 2.2.7 EMCV cDNA全长克隆的体外转录 | 第29-30页 |
| 2.2.8 病毒的拯救 | 第30页 |
| 2.2.9 拯救病毒的鉴定 | 第30-32页 |
| 2.2.10 拯救病毒一步生长曲线的测定 | 第32页 |
| 2.2.11 拯救病毒攻毒小鼠半数致死量的测定 | 第32页 |
| 2.2.12 拯救病毒在攻毒小鼠脏器中的病毒载量分析 | 第32页 |
| 2.3 结果 | 第32-39页 |
| 2.3.1 EMCV的增殖培养 | 第32-33页 |
| 2.3.2 RT-PCR鉴定EMCV | 第33页 |
| 2.3.3 EMCV cDNA全长的RT-PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.3.4 EMCV cDNA全长重组载体的构建与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.5 体外转录及病毒拯救 | 第35页 |
| 2.3.6 拯救病毒的鉴定 | 第35-37页 |
| 2.3.7 一步生长曲线的测定 | 第37页 |
| 2.3.8 拯救病毒攻毒小鼠半数致死量的测定 | 第37-38页 |
| 2.3.9 拯救病毒在攻毒小鼠脏器中的分布与载量 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 表达PEDV COE蛋白的重组脑心肌炎病毒的构建 | 第41-62页 |
| 3.1 材料 | 第41页 |
| 3.1.1 毒株、细胞和实验动物 | 第41页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 3.2 方法 | 第41-49页 |
| 3.2.1 COE基因重组EMCV载体的构建策略 | 第41-42页 |
| 3.2.2 引物设计 | 第42-43页 |
| 3.2.3 PEDV RNA的提取及cDNA的准备 | 第43页 |
| 3.2.4 COE基因重组EMCV载体的构建 | 第43-45页 |
| 3.2.5 重组载体的体外转录 | 第45-46页 |
| 3.2.6 重组病毒的拯救 | 第46页 |
| 3.2.7 重组病毒的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.8 重组病毒一步生长曲线的测定 | 第47页 |
| 3.2.9 重组病毒攻毒小鼠的半数致死量测定 | 第47-48页 |
| 3.2.10 重组病毒在攻毒小鼠脏器中病毒载量分析 | 第48页 |
| 3.2.11 重组病毒攻毒小鼠的组织病理学变化 | 第48页 |
| 3.2.12 重组病毒攻毒小鼠后产生抗体的ELISA检测 | 第48-49页 |
| 3.3 结果 | 第49-60页 |
| 3.3.1 PEDV COE基因的RT-PCR扩增 | 第49页 |
| 3.3.2 重组片段的RT-PCR扩增 | 第49-52页 |
| 3.3.3 COE基因重组EMCV载体的酶切鉴定 | 第52页 |
| 3.3.4 COE基因重组EMCV载体的测序鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.5 重组病毒的体外转录及拯救 | 第53页 |
| 3.3.6 重组病毒的鉴定 | 第53-57页 |
| 3.3.7 重组病毒一步生长曲线的测定 | 第57页 |
| 3.3.8 重组病毒攻毒小鼠半数致死量的测定 | 第57-58页 |
| 3.3.9 重组病毒在攻毒小鼠脏器的病毒载量分析 | 第58页 |
| 3.3.10 重组病毒攻毒小鼠脏器的病理组织变化 | 第58-59页 |
| 3.3.11 重组病毒攻毒小鼠抗体的ELISA检测结果 | 第59-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 全文结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |
