| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 鹿茸的简介 | 第11-12页 |
| 1.2 鹿茸的生长过程 | 第12页 |
| 1.3 影响鹿茸生长的因子 | 第12-16页 |
| 1.4 胰岛素生长因子受体Ⅰ型的结构、功能及研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4.1 胰岛素生长因子受体Ⅰ型的结构、功能 | 第16-17页 |
| 1.4.2 胰岛素样生长因子及其受体在鹿茸中的研究进展 | 第17页 |
| 1.5 RNAi | 第17-20页 |
| 1.5.1 RNAi的基本概念 | 第17-18页 |
| 1.5.2 RNAi的分子作用机制 | 第18-20页 |
| 1.5.3 SHRNA技术面临的挑战 | 第20页 |
| 1.6 本论文的意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-39页 |
| 2.1 材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 干扰载体 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要试剂及耗材 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.5 主要溶液及相关缓冲液 | 第24-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-38页 |
| 2.2.1 软骨细胞的分离与培养、冻存和复苏 | 第25-26页 |
| 2.2.2 IGF1R基因RNAi重组干扰质粒构建 | 第26-30页 |
| 2.2.3 重组质粒克隆及提取 | 第30页 |
| 2.2.4 重组质粒转染及条件优化 | 第30-31页 |
| 2.2.5 转染后软骨细胞总RNA提取及检测 | 第31-32页 |
| 2.2.6 第一链cDNA的合成 | 第32页 |
| 2.2.7 转染后软骨细胞相关基因相对表达量分析 | 第32-34页 |
| 2.2.8 转染后软骨细胞相关蛋白的Western blot分析 | 第34-37页 |
| 2.2.9 软骨细胞转染后细胞活性检测 | 第37页 |
| 2.2.10 软骨细胞转染后细胞周期检测 | 第37-38页 |
| 2.2.11 转染后软骨细胞凋亡检测 | 第38页 |
| 2.3 统计分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-49页 |
| 3.1 软骨细胞冻存方式及程序改进方法的探究 | 第39页 |
| 3.2 IGF1R RNAi重组质粒酶切及测序鉴定 | 第39-41页 |
| 3.3 IGF1R RNAi重组质粒转染鹿茸软骨细胞 | 第41页 |
| 3.4 软骨细胞总RNA质量 | 第41-42页 |
| 3.5 IGF1R RNAi重组质粒的效果鉴定 | 第42-44页 |
| 3.5.1 IGF1R mRNA水平的鉴定干扰效果 | 第42-43页 |
| 3.5.2 蛋白质水平分析IGF1R干扰的效率 | 第43-44页 |
| 3.6 IGF1R沉默对软骨细胞增殖的影响 | 第44-45页 |
| 3.7 IGF1R 沉默对软骨细胞周期的影响 | 第45-46页 |
| 3.8 IGF1R沉默对软骨细胞凋亡的影响 | 第46-47页 |
| 3.9 IGF1R沉默对软骨细胞相关基因mRNA表达的影响 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 4.1 干扰IGF-1R基因后对软骨细胞生长增殖的影响 | 第50-51页 |
| 4.2 干扰IGF-1R基后对软骨细胞凋亡水平的影响 | 第51-52页 |
| 5 总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
