| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 猪传染性胃肠炎的概述 | 第12页 |
| 1.2 TGEV的病原学特性 | 第12-13页 |
| 1.2.1 TGEV的分类和培养特性 | 第12页 |
| 1.2.2 TGEV的理化特性 | 第12-13页 |
| 1.3 TGEV的基因组结构特征 | 第13-16页 |
| 1.3.1 TGEV基因组 | 第13-14页 |
| 1.3.2 TGEV编码的非结构蛋白 | 第14-15页 |
| 1.3.3 TGEV编码的结构蛋白及附属蛋白 | 第15-16页 |
| 1.4 TGEV与炎症反应 | 第16页 |
| 1.5 NF-κB信号通路 | 第16-19页 |
| 1.5.1 NF-κB家族 | 第17页 |
| 1.5.2 IκB蛋白家族 | 第17-18页 |
| 1.5.3 IKK家族 | 第18页 |
| 1.5.4 NF-κB经典与非经典通路 | 第18-19页 |
| 1.6 冠状病毒与NF-κB信号通路的关系 | 第19-20页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-32页 |
| 2.1 材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 主要试验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 工具酶及主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 Western Blot和IFA所需材料 | 第21-22页 |
| 2.1.4 引物合成 | 第22-25页 |
| 2.1.5 试验仪器和设备 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 TGEV的增殖及紫外灭活 | 第25页 |
| 2.2.2 TGEV的半数细胞培养物感染量（TCID50）的测定 | 第25页 |
| 2.2.3 TGEV RNA的提取及RT-PCR扩增目的片段 | 第25-26页 |
| 2.2.4 限制性内切酶的酶切反应 | 第26-27页 |
| 2.2.5 PCR产物或酶切产物的电泳检测及纯化 | 第27页 |
| 2.2.6 DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第27页 |
| 2.2.7 连接产物的转化 | 第27页 |
| 2.2.8 重组菌的鉴定与阳性质粒的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.9 质粒的转染 | 第28-29页 |
| 2.2.10 Western Blot检测蛋白在真核细胞中的表达 | 第29-30页 |
| 2.2.11 IFA检测蛋白在真核细胞中的表达 | 第30-31页 |
| 2.2.12 双荧光素酶检测实验 | 第31页 |
| 2.2.13 荧光显微镜的观察 | 第31页 |
| 2.2.14 数据的处理 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-43页 |
| 3.1 TGEV激活NF-κB信号通路的检测 | 第32-34页 |
| 3.1.1 TGEV TCID50的测定及紫外灭活后TGEV灭活效果的检测 | 第32页 |
| 3.1.2 TGEV的复制与激活NF-κB信号通路的关系 | 第32-33页 |
| 3.1.3 TGEV接种的滴度与激活NF-κB信号通路的关系 | 第33页 |
| 3.1.4 TGEV对p65的影响 | 第33-34页 |
| 3.2 TGEV激活NF-κB信号通路的关键蛋白的确定 | 第34-39页 |
| 3.2.1 TGEV各段基因的真核表达载体的构建与鉴定 | 第34-36页 |
| 3.2.2 TGEV激活NF-κB信号通路关键蛋白的筛选 | 第36-37页 |
| 3.2.3 过表达Nsp2对NF-κB信号通路的影响 | 第37页 |
| 3.2.4 Nsp2表达对细胞中IκBα和p65的影响 | 第37-39页 |
| 3.3 Nsp2激活NF-κB信号通路的关键功能域的确定 | 第39-43页 |
| 3.3.1 Nsp2截短基因的真核表达载体的构建 | 第39-42页 |
| 3.3.2 Nsp2激活NF-κB信号通路关键功能域的确定 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 4.1 提高TGEV各蛋白在ST细胞中表达方法的优化 | 第43页 |
| 4.2 TGEV激活NF-κB信号通路分子机制的初步探讨 | 第43-44页 |
| 4.3 TGEV Nsp2激活NF-κB信号通路分子机制的初步探讨 | 第44-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 附录 | 第55-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
