| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 综述 | 第12-25页 |
| 1.1 细胞凋亡与Bcl-2家族蛋白 | 第12-17页 |
| 1.1.1 细胞凋亡 | 第12-13页 |
| 1.1.2 Bcl-2家族蛋白 | 第13-15页 |
| 1.1.3 Mcl-1蛋白 | 第15-17页 |
| 1.2 BH3功能模拟分子 | 第17-21页 |
| 1.3 泛素化和Mule | 第21-22页 |
| 1.4 蛋白质结晶 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的选题依据和研究内容 | 第23-25页 |
| 2 重组Mcl-1蛋白的表达纯化及活性与结构的鉴定 | 第25-41页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料、试剂与仪器 | 第25-28页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第26页 |
| 2.2.4 实验溶液的配制 | 第26-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.3.1 感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.3.2 质粒转化 | 第28-29页 |
| 2.3.3 重组Mcl-1蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.3.4 重组Mcl-1蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.5 蛋白质浓度的测定 | 第31-32页 |
| 2.3.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.3.7 Western Blot | 第33-34页 |
| 2.3.8 等温滴定量热实验 | 第34页 |
| 2.3.9 蛋白质~1H-~(15)N HSQC谱图的测定 | 第34页 |
| 2.4 实验结果 | 第34-40页 |
| 2.4.1 重组Mcl-1蛋白的诱导表达 | 第35-36页 |
| 2.4.2 重组Mcl-1蛋白的纯化 | 第36-38页 |
| 2.4.3 重组Mcl-1蛋白活性的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.4.4 重组Mcl-1蛋白三维结构的鉴定 | 第39-40页 |
| 2.5 讨论 | 第40页 |
| 2.6 本章小结 | 第40-41页 |
| 3 Mcl-1与Mule BH3肽段的共结晶 | 第41-53页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 实验材料、试剂与仪器 | 第41-42页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第41页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第41-42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-44页 |
| 3.3.1 Mcl-1与Mule BH3肽段共结晶条件的初筛 | 第42-43页 |
| 3.3.2 Mcl-1与Mule BH3肽段共结晶条件的优化 | 第43页 |
| 3.3.3 Mcl-1与Mule BH3肽段复合物晶体衍射数据的收集 | 第43页 |
| 3.3.4 Mcl-1与Mule BH3肽段复合物晶体结构的解析 | 第43-44页 |
| 3.4 实验结果 | 第44-51页 |
| 3.4.1 Mcl-1与Mule BH3肽段共结晶条件的初筛 | 第44-45页 |
| 3.4.2 Mcl-1与Mule BH3肽段共结晶条件的优化 | 第45-46页 |
| 3.4.3 晶体X-射线衍射数据的收集和解析 | 第46-49页 |
| 3.4.4 Mcl-1与Mule BH3肽段作用机制的分析 | 第49-51页 |
| 3.5 讨论 | 第51-52页 |
| 3.6 本章小结 | 第52-53页 |
| 4 Mcl-1蛋白与BH3模拟分子S1-16的共结晶 | 第53-60页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料、试剂与仪器 | 第53页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第53页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第53页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-55页 |
| 4.3.1 蛋白晶体浸泡法 | 第53-54页 |
| 4.3.2 Mcl-1与S1-16共结晶条件的初筛 | 第54页 |
| 4.3.3 Mcl-1与S1-16共结晶条件的优化 | 第54-55页 |
| 4.3.4 蛋白晶体染色 | 第55页 |
| 4.3.5 Mcl-1与S1-16共结晶晶体衍射测试和数据收集 | 第55页 |
| 4.4 实验结果 | 第55-58页 |
| 4.4.1 Mcl-1与S1-16共结晶晶体的获得 | 第55-57页 |
| 4.4.2 蛋白质晶体的X-射线衍射检测 | 第57-58页 |
| 4.5 讨论 | 第58页 |
| 4.6 本章小结 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录A 蛋白质结晶试剂 | 第69-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
