| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第10-15页 |
| 1.1 Vav3的结构特点 | 第10-11页 |
| 1.2 Vav3在淋巴细胞免疫应答反应中的作用 | 第11-12页 |
| 1.2.1 Vav3在B细胞免疫应答中的作用 | 第11-12页 |
| 1.2.2 Vav3在T细胞免疫应答中的作用 | 第12页 |
| 1.3 Vav3在体内生理生化功能 | 第12-14页 |
| 1.3.1 Vav3的酪氨酸磷酸化 | 第12-13页 |
| 1.3.2 Vav3在多种信号通路中的作用 | 第13页 |
| 1.3.3 Vav3与DNA甲基化 | 第13页 |
| 1.3.4 Vav3参与调节细胞形态、细胞周期和影响细胞分裂 | 第13-14页 |
| 1.4 Vav3在肿瘤疾病中的研究 | 第14页 |
| 1.5 小结 | 第14-15页 |
| 第2章 日本七鳃鳗Vav3分子的克隆以及生物信息学分析 | 第15-32页 |
| 2.1 七鳃鳗Vav3基因的分子克隆 | 第15-20页 |
| 2.1.1 材料 | 第15页 |
| 2.1.2 方法 | 第15-18页 |
| 2.1.2.1 引物设计 | 第15-16页 |
| 2.1.2.2 提取白细胞 | 第16页 |
| 2.1.2.3 七鳃鳗各组织总RNA提取 | 第16-17页 |
| 2.1.2.4 RNA反转录 | 第17页 |
| 2.1.2.5 PCR扩增目的片段 | 第17-18页 |
| 2.1.2.6 回收目的片段与载体连接并提质粒测序 | 第18页 |
| 2.1.3 结果 | 第18-20页 |
| 2.1.3.1 总RNA提取 | 第18-19页 |
| 2.1.3.2 检测cDNA模板 | 第19页 |
| 2.1.3.3 Vav3基因克隆 | 第19-20页 |
| 2.2 七鳃鳗Vav3基因序列生物信息学分析 | 第20-31页 |
| 2.2.1 软件、在线网站和数据库 | 第20页 |
| 2.2.2 结果 | 第20-31页 |
| 2.2.2.1 理化性质分析 | 第20-21页 |
| 2.2.2.2 功能结构预测 | 第21-22页 |
| 2.2.2.3 同源序列比对 | 第22-25页 |
| 2.2.2.4 二级结构域预测 | 第25-26页 |
| 2.2.2.5 三级结构预测 | 第26页 |
| 2.2.2.6 Vav3系统发育分析 | 第26-28页 |
| 2.2.2.7 Vav3保守基序分析 | 第28-31页 |
| 2.3 讨论 | 第31页 |
| 2.4 小结 | 第31-32页 |
| 第3章 七鳃鳗Vav3基因原核表达与蛋白纯化 | 第32-42页 |
| 3.1 材料 | 第32页 |
| 3.2 方法 | 第32-38页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第32-33页 |
| 3.2.2 PCR扩增 | 第33-34页 |
| 3.2.3 目的片段回收 | 第34页 |
| 3.2.4 目的片段与表达载体连接 | 第34页 |
| 3.2.5 转化 | 第34页 |
| 3.2.6 阳性菌落的鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.7 Vav3蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| 3.2.8 SDS-PAGE鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.9 重组蛋白的纯化 | 第36-38页 |
| 3.3 结果 | 第38-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41页 |
| 3.5 小结 | 第41-42页 |
| 第4章 七鳃鳗Vav3多克隆抗体的制备及鉴定 | 第42-47页 |
| 4.1 材料和方法 | 第42-45页 |
| 4.1.1 材料 | 第42页 |
| 4.1.2 方法 | 第42-45页 |
| 4.2 结果 | 第45-46页 |
| 4.2.1 鉴定七鳃鳗Vav3多克隆抗体的效价 | 第45-46页 |
| 4.2.2 检测七鳃鳗Vav3多克隆抗体的特异性 | 第46页 |
| 4.3 讨论 | 第46页 |
| 4.4 小结 | 第46-47页 |
| 第5章 七鳃鳗Vav3蛋白相关免疫学研究 | 第47-53页 |
| 5.1 Real-time PCR检测Vav3的表达 | 第47-49页 |
| 5.1.1 材料 | 第47页 |
| 5.1.2 方法 | 第47-49页 |
| 5.1.2.1 免疫 | 第47页 |
| 5.1.2.2 提取白细胞 | 第47页 |
| 5.1.2.3 提取RNA | 第47-48页 |
| 5.1.2.4 Real-time PCR检测免疫前后Vav3的表达 | 第48-49页 |
| 5.1.3 结果 | 第49页 |
| 5.2 Western blot检测 | 第49-51页 |
| 5.2.1 材料 | 第49页 |
| 5.2.2 方法 | 第49-50页 |
| 5.2.3 结果 | 第50-51页 |
| 5.3 讨论 | 第51-52页 |
| 5.4 小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 本文创新点 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录A 稀释倍数标准曲线 | 第60-61页 |
| 附录B pET-32a(+)质粒图谱 | 第61-62页 |
| 附录C 蛋白浓度测定标准曲线 | 第62-63页 |
| 附录D 日本七鳃鳗Vav3氨基酸序列 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
