| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 中英缩略词对照 | 第9-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-16页 |
| 第2章 材料和方法 | 第16-32页 |
| ·材料 | 第16-19页 |
| ·细胞株和菌株 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·主要试剂配制 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-32页 |
| ·K562细胞培养 | 第19-20页 |
| ·NGAL原核表达载体的构建策略 | 第20-21页 |
| ·K562细胞总RNA的提取 | 第21页 |
| ·两步法RT-PCR | 第21-23页 |
| ·质粒pET28a和NGAL的双酶切(HindⅢ、BamHⅠ)反应,DNA片段回收及T4连接反应 | 第23-25页 |
| ·将连接产物pET28a-NGAL转化大肠杆菌Rosetta DE3 | 第25页 |
| ·pET28a-NGAL重组基因的鉴定 | 第25-27页 |
| ·NGAL融合蛋白的诱导表达及切胶纯化 | 第27-29页 |
| ·NGAL多克隆抗体的制备 | 第29-30页 |
| ·兔抗人NGAL多克隆抗体滴度和特异性检测 | 第30-32页 |
| 第3章 结果 | 第32-36页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第32页 |
| ·酶切鉴定重组载体 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE检测在大肠杆菌Rosetta DE3中目的蛋白的表达 | 第33-34页 |
| ·目的蛋白可溶性分析 | 第34页 |
| ·切胶纯化后目的蛋白的检测 | 第34-35页 |
| ·多克隆抗体的效价及特异性检测 | 第35页 |
| ·抗NGAL多克隆抗体检测乳腺癌组织中NGAL的表达 | 第35-36页 |
| 第4章 讨论 | 第36-39页 |
| ·研究人NGAL蛋白的现状和意义 | 第36页 |
| ·重组质粒的构建及融合蛋白的表达 | 第36-37页 |
| ·抗体制备 | 第37-39页 |
| 第5章 结论 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第44-45页 |
| 综述 | 第45-51页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
