| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 漆酶概述 | 第14页 |
| 1.2 漆酶的分布 | 第14-16页 |
| 1.2.1 真菌中的漆酶 | 第14-15页 |
| 1.2.2 细菌中的漆酶 | 第15页 |
| 1.2.3 植物中的漆酶 | 第15页 |
| 1.2.4 动物中的漆酶 | 第15-16页 |
| 1.3 漆酶的生化性质 | 第16页 |
| 1.4 漆酶的结构特点和催化机制 | 第16-23页 |
| 1.4.1 漆酶基本结构特征 | 第16-17页 |
| 1.4.2 漆酶肽链结构特征 | 第17-18页 |
| 1.4.3 漆酶空间结构 | 第18-20页 |
| 1.4.4 漆酶催化机制 | 第20页 |
| 1.4.5 T1-Cu结合位点及与还原性底物的反应 | 第20-22页 |
| 1.4.6 TNC中心反应机制 | 第22-23页 |
| 1.4.7 氧通道和水通道 | 第23页 |
| 1.5 漆酶的分子生物学研究进展 | 第23-24页 |
| 1.5.1 漆酶基因的克隆 | 第23页 |
| 1.5.2 漆酶基因的异源表达 | 第23-24页 |
| 1.5.3 漆酶基因家族 | 第24页 |
| 1.6 漆酶的分离纯化 | 第24-25页 |
| 1.6.1 酶分离纯化常见方法步骤 | 第24页 |
| 1.6.2 不同来源漆酶的分离纯化 | 第24-25页 |
| 1.7 漆酶的应用 | 第25-26页 |
| 1.7.1 食品工业 | 第25页 |
| 1.7.2 工业染料废水处理 | 第25页 |
| 1.7.3 食用菌生产 | 第25页 |
| 1.7.4 其它领域 | 第25-26页 |
| 第2章 引言 | 第26-30页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第26页 |
| 2.2 研究的主要内容 | 第26-28页 |
| 2.2.1 平菇漆酶基因生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.2.2 杂优-2 平菇漆酶分离纯化 | 第27页 |
| 2.2.3 杂优-2 平菇漆酶的酶学性质与动力学研究 | 第27页 |
| 2.2.4 金属离子、化合物和有机溶剂对杂优-2 平菇漆酶的影响 | 第27页 |
| 2.2.5 杂优-2 平菇漆酶功能基团的研究 | 第27-28页 |
| 2.3 杂优-2 平菇漆酶分离纯化技术路线 | 第28-30页 |
| 第3章 平菇漆酶基因的生物信息学分析 | 第30-48页 |
| 3.1 研究对象与平台 | 第30页 |
| 3.1.1 研究对象 | 第30页 |
| 3.1.2 研究平台 | 第30页 |
| 3.2 研究方法 | 第30-33页 |
| 3.2.1 提取平菇全基因组注释信息中与漆酶相关的信息 | 第30页 |
| 3.2.2 从平菇全基因组中提取漆酶基因序列及上游可能的启动子序列 | 第30页 |
| 3.2.3 漆酶基因上游启动子区域分析 | 第30-31页 |
| 3.2.4 漆酶基因系统进化分析 | 第31页 |
| 3.2.5 11 条漆酶基因的序列相似性分析 | 第31页 |
| 3.2.6 漆酶基因限制性酶切位点分析 | 第31页 |
| 3.2.7 漆酶推断氨基酸序列的获取 | 第31页 |
| 3.2.8 漆酶推断氨基酸序列相似性分析 | 第31-32页 |
| 3.2.9 漆酶推断氨基酸多序列比对 | 第32页 |
| 3.2.10 漆酶推断氨基酸序列motif分析 | 第32页 |
| 3.2.11 信号肽预测及亚细胞定位 | 第32页 |
| 3.2.12 漆酶推断氨基酸序列理化性质预测及组成分析 | 第32-33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-46页 |
| 3.3.1 从平菇全基因组中提取漆酶基因序列 | 第33页 |
| 3.3.2 漆酶基因上游启动子区域分析 | 第33-34页 |
| 3.3.3 漆酶基因系统进化分析 | 第34-35页 |
| 3.3.4 11条漆酶基因序列相似性分析 | 第35-36页 |
| 3.3.5 漆酶基因限制性酶切位点分析 | 第36页 |
| 3.3.6 漆酶推断氨基酸序列的获取 | 第36-37页 |
| 3.3.7 漆酶推断氨基酸序列进化分析 | 第37-38页 |
| 3.3.8 漆酶推断氨基酸多序列比对 | 第38-39页 |
| 3.3.9 漆酶推断氨基酸序列motif分析 | 第39-42页 |
| 3.3.10 信号肽预测及亚细胞定位 | 第42页 |
| 3.3.11 漆酶推断氨基酸理化性质预测 | 第42-43页 |
| 3.3.12 漆酶推断氨基酸重要理化性质分析 | 第43-44页 |
| 3.3.13 漆酶推断氨基酸组成分析 | 第44-46页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第46-48页 |
| 第4章 杂优-2 平菇漆酶分离纯化、酶学性质及功能基团研究 | 第48-70页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第48-51页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.1.2 平板培养基 | 第48页 |
| 4.1.3 液体培养基 | 第48页 |
| 4.1.4 主要试剂 | 第48-49页 |
| 4.1.5 主要仪器与设备 | 第49页 |
| 4.1.6 主要试剂配制 | 第49-51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-56页 |
| 4.2.1 漆酶的酶活力测定 | 第51页 |
| 4.2.2 蛋白质含量测定 | 第51-52页 |
| 4.2.3 菌丝培养 | 第52页 |
| 4.2.4 杂优-2 平菇漆酶在液体培养基中的变化规律 | 第52页 |
| 4.2.5 杂优-2 平菇漆酶粗酶液的制备 | 第52页 |
| 4.2.6 杂优-2 平菇漆酶初酶液的制备 | 第52页 |
| 4.2.7 DEAE-Sepharose fast flow层析 | 第52页 |
| 4.2.8 Superdex-200 prep grade层析 | 第52-53页 |
| 4.2.9 漆酶纯度鉴定 | 第53页 |
| 4.2.10 漆酶亚基分子质量 | 第53-54页 |
| 4.2.11 漆酶全酶分子质量 | 第54页 |
| 4.2.12 漆酶最适反应温度与热稳定性的测定 | 第54页 |
| 4.2.13 漆酶最适反应pH值与酸碱稳定性的测定 | 第54-55页 |
| 4.2.14 不同金属离子对漆酶活性的影响 | 第55页 |
| 4.2.15 不同化合物对漆酶活性的影响 | 第55页 |
| 4.2.16 不同醇类有机溶剂对漆酶活性的影响 | 第55页 |
| 4.2.17 漆酶米氏常数（K_m）和最大反应速度（V_(max)）的测定 | 第55页 |
| 4.2.18 功能基团研究 | 第55-56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-67页 |
| 4.3.1 杂优-2 平菇漆酶在液体培养基中的活性变化规律 | 第56页 |
| 4.3.2 DEAE-Sepharose fast flow层析 | 第56-57页 |
| 4.3.3 Superdex-200 prep grade层析 | 第57-58页 |
| 4.3.4 漆酶纯度鉴定 | 第58页 |
| 4.3.5 杂优-2 平菇漆酶亚基分子质量测定 | 第58-59页 |
| 4.3.6 杂优-2 平菇漆酶全酶分子质量测定 | 第59-60页 |
| 4.3.7 漆酶最适反应温度与热稳定性的测定 | 第60-61页 |
| 4.3.8 漆酶最适反应pH值与酸碱稳定性的测定 | 第61页 |
| 4.3.9 不同金属离子对漆酶活性的影响 | 第61-62页 |
| 4.3.10 不同化合物对漆酶酶活性的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.11 不同醇类有机溶剂对漆酶酶活性影响 | 第63页 |
| 4.3.12 漆酶米氏常数（K_m）和最大反应速度（V_(max)）的变化 | 第63-64页 |
| 4.3.13 BD化学修饰精氨酸残基 | 第64-65页 |
| 4.3.14 SUAN化学修饰赖氨酸残基 | 第65页 |
| 4.3.15 DTT化学修饰二硫键 | 第65-66页 |
| 4.3.16 PMSF化学修饰丝氨酸残基 | 第66页 |
| 4.3.17 NBS化学修饰色氨酸残基 | 第66-67页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第67-70页 |
| 第5章 结论、创新和展望 | 第70-72页 |
| 5.1 主要结论 | 第70-71页 |
| 5.1.1 平菇漆酶基因生物信息学分析 | 第70页 |
| 5.1.2 杂优-2 平菇漆酶分离纯化 | 第70页 |
| 5.1.3 杂优-2 平菇漆酶性质研究 | 第70页 |
| 5.1.4 杂优-2 平菇漆酶功能基团研究 | 第70-71页 |
| 5.2 创新 | 第71页 |
| 5.3 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 在校期间发表的论文 | 第84页 |
