| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-26页 |
| 1.1 嗜热菌和嗜热酶 | 第11-14页 |
| 1.1.1 嗜热菌概述 | 第11-12页 |
| 1.1.2 嗜热酶概述 | 第12-14页 |
| 1.2 SGNH家族水解酶的研究进展 | 第14-20页 |
| 1.2.1 SGNH家族水解酶概述 | 第14-16页 |
| 1.2.2 SGNH家族水解酶的结构特征 | 第16-18页 |
| 1.2.3 SGNH家族水解酶的催化机制 | 第18-19页 |
| 1.2.4 SGNH家族水解酶的功能 | 第19-20页 |
| 1.3 7-ACA及其脱乙酰化的研究进展 | 第20-25页 |
| 1.3.1 7-ACA | 第20-21页 |
| 1.3.2 7-ACA脱乙酰化的途径 | 第21-22页 |
| 1.3.3 SGNH家族水解酶将 7-ACA脱乙酰化的催化机制 | 第22-23页 |
| 1.3.4 7-ACA脱乙酰化检测方法的比较 | 第23-25页 |
| 1.4 研究内容 | 第25页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第2章 重组SGNH家族酯酶的基因表达、纯化及酶学性质研究 | 第26-71页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-31页 |
| 2.1.1 实验所用质粒及菌株 | 第26页 |
| 2.1.2 实验所用主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.3 实验所用主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 引物合成与DNA测序 | 第28页 |
| 2.1.5 常用培养基 | 第28页 |
| 2.1.6 常用溶液 | 第28-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-42页 |
| 2.2.1 大肠杆菌BL21(DE3) 感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.2 芽孢杆菌K91和脂环酸芽孢杆菌D-1 基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.3 K91-Est8、K91-Est19和EstD1的序列分析 | 第32页 |
| 2.2.4 重组质粒的构建 | 第32-35页 |
| 2.2.5 重组质粒的转化 | 第35页 |
| 2.2.6 重组酶在大肠杆菌中的诱导表达 | 第35-36页 |
| 2.2.7 重组酶的纯化、鉴定及蛋白定量 | 第36-38页 |
| 2.2.8 重组酶酶活的测定方法 | 第38-39页 |
| 2.2.9 重组酶酶学性质的研究 | 第39-41页 |
| 2.2.10 重组酶对 7-ACA脱乙酰化的研究 | 第41-42页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第42-66页 |
| 2.3.1 芽孢杆菌K91和脂环酸芽孢杆菌D-1 基因组DNA的提取 | 第42页 |
| 2.3.2 K91-Est8的序列分析、表达、纯化及酶学性质研究 | 第42-51页 |
| 2.3.3 K91-Est19的序列分析、表达、纯化及酶学性质研究 | 第51-59页 |
| 2.3.4 EstD1的序列分析、表达、纯化及酶学性质研究 | 第59-66页 |
| 2.4 讨论 | 第66-68页 |
| 2.5 本章小结 | 第68-71页 |
| 第3章 重组SGNH家族酯酶催化残基的研究 | 第71-85页 |
| 3.1 实验材料 | 第71-72页 |
| 3.1.1 菌株 | 第71页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第71页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第71页 |
| 3.1.4 引物合成与DNA测序 | 第71页 |
| 3.1.5 常用培养基 | 第71页 |
| 3.1.6 常用溶液 | 第71-72页 |
| 3.2 实验方法 | 第72-74页 |
| 3.2.1 K91-Est8、K91-Est19和EstD1的催化活性位点分析 | 第72页 |
| 3.2.2 蛋白酶抑制剂对重组SGNH家族酯酶活性的影响 | 第72页 |
| 3.2.3 突变型重组SGNH家族酯酶的制备 | 第72-74页 |
| 3.2.4 突变型重组SGNH家族酯酶的活性测定及动力学分析 | 第74页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第74-82页 |
| 3.3.1 K91-Est8、K91-Est19和EstD1的催化活性位点分析 | 第74-75页 |
| 3.3.2 蛋白酶抑制剂对重组SGNH家族酯酶活性的影响 | 第75页 |
| 3.3.3 突变型重组SGNH家族酯酶的制备 | 第75-81页 |
| 3.3.4 突变型重组SGNH家族酯酶的活性测定及动力学分析 | 第81-82页 |
| 3.4 讨论 | 第82-83页 |
| 3.5 本章小结 | 第83-85页 |
| 第4章 总结、创新与展望 | 第85-89页 |
| 4.1 总结 | 第85-87页 |
| 4.2 创新 | 第87页 |
| 4.3 展望 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-94页 |
| 附录 | 第94-99页 |
| 附录A 实验中所使用的 50mM缓冲液的配置 | 第94-95页 |
| A1不同pH值的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液的配制 | 第94页 |
| A2不同pH值的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液的配制 | 第94-95页 |
| 附录B 三条SGNH家族酯酶基因序列及氨基酸序列 | 第95-98页 |
| B1 K91-Est8的核苷酸序列 | 第95页 |
| B2 K91-Est8的氨基酸序列 | 第95页 |
| B3 K91-Est19的核苷酸序列 | 第95-96页 |
| B4 K91-Est19的氨基酸序列 | 第96页 |
| B5 EstD1的核苷酸序列 | 第96-97页 |
| B6 EstD1的氨基酸序列 | 第97-98页 |
| 附录C 氨基酸中英文对照及缩写表 | 第98-99页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及研究成果 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
