| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第15-39页 |
| 第一章 猪瘟病毒研究进展 | 第15-20页 |
| 1.1 病原学研究概述 | 第15-18页 |
| 1.1.1 CSFV结构以及生物学特性 | 第15页 |
| 1.1.2 猪瘟病毒基因组结构及编码蛋白的生物学功能 | 第15-18页 |
| 1.2 流行病学 | 第18-20页 |
| 1.2.1 易感动物 | 第18页 |
| 1.2.2 传播途径 | 第18-19页 |
| 1.2.3 猪瘟病毒的进化分群 | 第19-20页 |
| 第二章 细胞自噬研究进展 | 第20-39页 |
| 2.1 自噬的分类 | 第20-23页 |
| 2.1.1 大分子自噬 | 第20-21页 |
| 2.1.2 小分子自噬 | 第21页 |
| 2.1.3 分子伴侣自噬 | 第21-23页 |
| 2.2 细胞自噬研究方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 自噬的静态检测 | 第23-26页 |
| 2.2.2 自噬动态过程检测技术 | 第26-27页 |
| 2.3 细胞自噬与病毒感染的相互作用 | 第27-39页 |
| 2.3.1 病毒诱导细胞自噬的机制 | 第28-29页 |
| 2.3.2 细胞自噬的抗病毒作用 | 第29-33页 |
| 2.3.3 病毒利用细胞自噬促进自身增殖 | 第33-36页 |
| 2.3.4 病毒抑制细胞自噬 | 第36-37页 |
| 2.3.5 自噬与病毒相互抗衡 | 第37-38页 |
| 2.3.6 病毒增殖与自噬无关 | 第38-39页 |
| 试验研究 | 第39-91页 |
| 第三章 猪瘟病毒感染ST细胞诱导自噬的发生 | 第39-58页 |
| 3.1 材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 细胞、病毒与质粒 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂、抗体及试剂盒 | 第39-40页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第40页 |
| 3.2 方法 | 第40-46页 |
| 3.2.1 主要溶液配制 | 第40-41页 |
| 3.2.2 细胞培养与猪瘟病毒的扩增及其感染复数的确定 | 第41页 |
| 3.2.3 GFP-LC3B质粒的扩增与鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.4 ST细胞接种猪瘟病毒与病毒增殖定量PCR检测 | 第42-43页 |
| 3.2.5 透射电镜观察自噬体 | 第43-44页 |
| 3.2.6 MDC染色观察自噬体 | 第44页 |
| 3.2.7 GFP-LC3B转染细胞检测病毒对LC3 的影响 | 第44-45页 |
| 3.2.8 Western blot检测自噬相关基因 | 第45页 |
| 3.2.9 CSFV诱导细胞自噬流的检测 | 第45-46页 |
| 3.2.10 灭活的病毒对细胞自噬的影响 | 第46页 |
| 3.3 结果 | 第46-55页 |
| 3.3.1 GFP-LC3B质粒的酶切鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.2 猪瘟病毒在ST细胞中增殖检测 | 第47-48页 |
| 3.3.3 MDC染色CSFV感染ST细胞 | 第48-50页 |
| 3.3.4 透射电镜观察CSFV感染ST细胞后诱导自噬体结构形成 | 第50-51页 |
| 3.3.5 CSFV感染ST细胞后诱导GFP-LC3 荧光聚点的形成 | 第51-52页 |
| 3.3.6 CSFV感染ST细胞后引起自噬相关蛋白的变化 | 第52-54页 |
| 3.3.7 CSFV感染ST细胞后诱导了完整的自噬反应 | 第54-55页 |
| 3.3.8 紫外线灭活病毒后Western blot检测LC3 的转化 | 第55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-57页 |
| 3.5 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 猪瘟病毒编码蛋白对细胞自噬的影响 | 第58-67页 |
| 4.1 材料 | 第58页 |
| 4.1.1 细胞与质粒 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂、抗体及试剂盒 | 第58页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第58页 |
| 4.2 方法 | 第58-60页 |
| 4.2.1 主要溶液配制 | 第58-59页 |
| 4.2.2 真核表达载体转染ST细胞 | 第59页 |
| 4.2.3 表达蛋白的鉴定 | 第59-60页 |
| 4.2.4 CSFV蛋白对自噬相关基因转录水平的影响 | 第60页 |
| 4.2.5 CSFV蛋白对自噬相关基因蛋白表达水平的影响 | 第60页 |
| 4.3 结果 | 第60-65页 |
| 4.3.1 真核表达载体转染ST细胞 | 第60-62页 |
| 4.3.2 表达蛋白的鉴定 | 第62页 |
| 4.3.3 CSFV蛋白对自噬相关基因转录水平的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.4 CSFV蛋白对自噬相关基因蛋白表达水平的影响 | 第63-65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-66页 |
| 4.5 小结 | 第66-67页 |
| 第五章 细胞自噬对猪瘟病毒复制的影响 | 第67-82页 |
| 5.1 材料 | 第67-68页 |
| 5.1.1 细胞、病毒与质粒 | 第67页 |
| 5.1.2 主要试剂、抗体及试剂盒 | 第67-68页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第68页 |
| 5.2 方法 | 第68-71页 |
| 5.2.1 主要缓冲液及试剂配制 | 第68页 |
| 5.2.2 CCK-8 试验检测药物对ST细胞的影响 | 第68页 |
| 5.2.3 病毒感染与药物处理 | 第68-70页 |
| 5.2.4 shRNA的转染与稳转筛选 | 第70页 |
| 5.2.5 基因干扰效果的鉴定 | 第70页 |
| 5.2.6 干扰自噬基因对猪瘟病毒复制的影响 | 第70-71页 |
| 5.3 结果 | 第71-80页 |
| 5.3.1 CCK-8 试验检测药物对ST细胞的影响 | 第71-72页 |
| 5.3.2 自噬激活剂Rapamycin促进了病毒增殖 | 第72-73页 |
| 5.3.3 自噬抑制剂 3MA降低了病毒增殖 | 第73-74页 |
| 5.3.4 自噬流阻断剂CQ有利于病毒增殖 | 第74-75页 |
| 5.3.5 不同加药方式对病毒增殖的影响 | 第75-77页 |
| 5.3.6 自噬基因LC3、ATG7、Beclin-1 的干扰以及鉴定 | 第77-79页 |
| 5.3.7 干扰自噬基因对CSFV增殖的影响 | 第79-80页 |
| 5.4 讨论 | 第80-81页 |
| 5.5 小结 | 第81-82页 |
| 第六章 自噬参与CSFV对ST细胞周期和增殖的调控 | 第82-91页 |
| 6.1 材料 | 第82-83页 |
| 6.1.1 细胞、病毒与质粒 | 第82页 |
| 6.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第82页 |
| 6.1.3 主要仪器设备 | 第82-83页 |
| 6.2 方法 | 第83-84页 |
| 6.2.1 主要缓冲液及试剂的配制 | 第83页 |
| 6.2.2 干扰自噬基因细胞株的获得 | 第83页 |
| 6.2.3 流式细胞术检测细胞周期 | 第83页 |
| 6.2.4 CCK-8 检测细胞增殖 | 第83页 |
| 6.2.5 BrdU染色检测细胞DNA | 第83-84页 |
| 6.2.6 定量PCR检测周期调节蛋白转录水平 | 第84页 |
| 6.3 结果 | 第84-90页 |
| 6.3.1 CSFV感染ST细胞对细胞周期的影响 | 第84-87页 |
| 6.3.2 CSFV感染ST细胞对细胞增殖的影响 | 第87页 |
| 6.3.3 CSFV对自噬基因缺陷细胞周期的影响 | 第87-89页 |
| 6.3.4 CSFV对自噬基因缺陷细胞增殖的影响 | 第89-90页 |
| 6.4 讨论 | 第90页 |
| 6.5 小结 | 第90-91页 |
| 结论 | 第91页 |
| 本文的创新点 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-107页 |
| 缩略词 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 作者简介 | 第109页 |
