| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第12-19页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.1.1 欧洲绿萼茄 | 第12页 |
| 1.1.2 东北紫萼茄 | 第12页 |
| 1.1.3 杂交茄 | 第12页 |
| 1.2 花青素概述 | 第12-17页 |
| 1.2.1 花青素的合成途径 | 第13-14页 |
| 1.2.2 花青素的生理功能作用机理 | 第14-15页 |
| 1.2.2.1 对生产及畜牧业的作用 | 第14页 |
| 1.2.2.2 在植物生长方面的作用 | 第14-15页 |
| 1.2.3 二氢黄酮醇4-还原酶(Dihydroflavonol 4-Reductase,DFR)的研究 | 第15-16页 |
| 1.2.4 MYB转录因子的研究 | 第16-17页 |
| 1.3 研究的目的及意义 | 第17页 |
| 1.4 研究的方法与技术路线 | 第17-19页 |
| 1.4.1 研究方法 | 第17-18页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第18-19页 |
| 2 三种茄子中花青素合成途径中相关基因的克隆 | 第19-39页 |
| 2.1 三种茄子的DFR和MYB基因保守区域的克隆 | 第19-27页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 试验方法 | 第19-23页 |
| 2.1.3.1 不同品种茄子萼片总RNA提取 | 第19-20页 |
| 2.1.3.2 三种茄子DFR基因保守区域引物设计 | 第20页 |
| 2.1.3.3 茄子萼片DFR基因3'RACE片段扩增 | 第20-21页 |
| 2.1.3.4 PCR产物的回收与纯化 | 第21页 |
| 2.1.3.5 载体连接与转化 | 第21-22页 |
| 2.1.3.6 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第22-23页 |
| 2.1.4 结果与分析 | 第23-27页 |
| 2.1.4.1 三种茄子萼片总RNA提取结果 | 第23页 |
| 2.1.4.2 茄子DFR3'及MYB3'RACE的PCR扩增结果 | 第23-24页 |
| 2.1.4.3 茄子DFR3'RACE阳性克隆菌液PCR检测结果 | 第24页 |
| 2.1.4.4 茄子DFR3'及MYB3'RACE测序结果 | 第24-27页 |
| 2.2 茄子DFR、MYB基因5'RACE片段克隆 | 第27-36页 |
| 2.2.1 试验材料 | 第27页 |
| 2.2.2 试验试剂 | 第27页 |
| 2.2.3 试验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.3.1 三种茄子萼片总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.3.2 茄子6个DFR、MYB基因5'RACE引物设计 | 第27-28页 |
| 2.2.3.3 三种茄子萼片总RNA的反转录 | 第28-29页 |
| 2.2.3.4 cDNA模板的纯化 | 第29页 |
| 2.2.3.5 cDNA模板的TdT加尾 | 第29页 |
| 2.2.3.6 5'RACE巢式PCR反应 | 第29-30页 |
| 2.2.3.7 目的片段的回收与连接转化 | 第30页 |
| 2.2.4 结果与分析 | 第30-36页 |
| 2.2.4.1 三种茄子萼片6个DFR、MYB基因5'RACE的PCR扩增结果 | 第30-31页 |
| 2.2.4.2 三种茄子DFR、MYB基因5'RACE测序结果 | 第31-36页 |
| 2.3 茄子DFR,MYB基因全长的获得 | 第36-38页 |
| 2.3.1 试验材料 | 第36页 |
| 2.3.2 试验试剂 | 第36页 |
| 2.3.3 试验方法 | 第36页 |
| 2.3.4 试验结果与分析 | 第36-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 3 三种茄子DFR、MYB基因特征及系统进化分析 | 第39-58页 |
| 3.1 三种茄子DFR、MYB基因的序列特征分析 | 第39-50页 |
| 3.1.1 欧洲DFR基因序列结构分析及结构预测 | 第39-41页 |
| 3.1.2 东北DFR基因序列结构分析及结构预测 | 第41-42页 |
| 3.1.3 杂交DFR基因序列结构分析及结构预测 | 第42-44页 |
| 3.1.4 欧洲MYB基因序列结构分析及结构预测 | 第44-46页 |
| 3.1.5 东北MYB基因序列结构分析及结构预测 | 第46-48页 |
| 3.1.6 杂交MYB基因序列结构分析及结构预测 | 第48-50页 |
| 3.2 茄子DFR及MYB基因的同源性分析与系统进化分析 | 第50-55页 |
| 3.2.1 茄子DFR基因的同源性分析与系统进化分析 | 第50-53页 |
| 3.2.2 茄子MYB基因的同源性分析与系统进化分析 | 第53-55页 |
| 3.3 讨论 | 第55-57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 4 三种茄子中DFR、MYB基因的Realtime PCR | 第58-64页 |
| 4.1 试验材料 | 第58-59页 |
| 4.2 试验试剂与仪器 | 第59-60页 |
| 4.3 试验方法 | 第60-61页 |
| 4.3.1 三种茄子四个生长时期萼片总RNA的提取 | 第60页 |
| 4.3.2 Realtime PCR模板cDNA的合成 | 第60页 |
| 4.3.3 Realtime PCR引物的设计 | 第60-61页 |
| 4.3.4 三种茄子中DFR,MYB基因的Realtime PCR检测 | 第61页 |
| 4.4 结果与分析 | 第61-62页 |
| 4.4.1 三种茄子DFR基因的Realtime PCR结果分析 | 第61-62页 |
| 4.4.2 三种茄子MYB基因的Realtime PCR结果分析 | 第62页 |
| 4.5 讨论 | 第62-63页 |
| 4.6 本章小结 | 第63-64页 |
| 5 三种茄子萼片的花青素含量测定 | 第64-66页 |
| 5.1 三种茄子四个不同生长期的花青素含量测定 | 第64页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第64页 |
| 5.1.2 试验试剂 | 第64页 |
| 5.1.3 试验方法 | 第64页 |
| 5.2 试验结果与分析 | 第64-65页 |
| 5.2.1 三种茄子四个时期花青素含量结果 | 第64-65页 |
| 5.3 讨论 | 第65页 |
| 5.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 6 三种茄子的MYB基因的转基因植株 | 第66-76页 |
| 6.1 试验材料 | 第66页 |
| 6.1.1 试验试剂 | 第66页 |
| 6.2 试验方法 | 第66-71页 |
| 6.2.1 三种茄子中3个MYB基因全长的扩增 | 第66-70页 |
| 6.2.1.1 基因利用attB-GENE-F/R引物进行PCR | 第66-68页 |
| 6.2.1.2 利用attB-adapter-F/R引物进行二次PCR | 第68页 |
| 6.2.1.3 利用attB-adapter-目的基因PCR产物进行BP反应 | 第68页 |
| 6.2.1.4 使用Top 10 Ecoli.Competent转化 | 第68-69页 |
| 6.2.1.5 BP反应菌液PCR检测 | 第69页 |
| 6.2.1.6 过表达Entry Clone质粒进行LR反应 | 第69-70页 |
| 6.2.1.7 使用Top 10 Ecoli.Competent转化 | 第70页 |
| 6.2.1.8 LR反应所得菌液PCR检测 | 第70页 |
| 6.2.2 农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第70页 |
| 6.2.2.1 重组质粒三亲杂交法转入农杆菌 | 第70页 |
| 6.2.3 蘸花法法遗传转化拟南芥 | 第70-71页 |
| 6.2.3.1 野生型拟南芥的培养 | 第70-71页 |
| 6.2.3.2 侵染野生型拟南芥 | 第71页 |
| 6.2.3.3 转基因植株的筛选 | 第71页 |
| 6.5 试验结果 | 第71-74页 |
| 6.5.1 基因利用attB-GENE-F/R引物进行PCR | 第71-73页 |
| 6.5.2 农杆菌菌液PCR | 第73-74页 |
| 6.6 讨论 | 第74-75页 |
| 6.7 本章小结 | 第75-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
