摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
第一章 文献综述 | 第11-20页 |
1.1 赤霉素发现与应用 | 第11-13页 |
1.2 赤霉素信号转导途径关键因子 | 第13-18页 |
1.2.1 GID1 | 第13页 |
1.2.2 GID2 | 第13-14页 |
1.2.3 DELLA | 第14-17页 |
1.2.4 赤霉素信号转导途径 | 第17-18页 |
1.3 酵母双杂交系统的原理 | 第18-19页 |
1.4 研究目的和意义 | 第19-20页 |
第二章 赤霉素对毛竹种子萌发及幼苗生长的影响 | 第20-24页 |
2.1 材料与仪器 | 第20页 |
2.1.1 试验材料 | 第20页 |
2.1.2 试剂与仪器 | 第20页 |
2.2 试验方法 | 第20-21页 |
2.2.1 种子发芽试验 | 第20页 |
2.2.2 幼苗生长实验 | 第20-21页 |
2.2.3 统计方法 | 第21页 |
2.3 结果与分析 | 第21-23页 |
2.3.1 毛竹种子发芽试验 | 第21-22页 |
2.3.2 幼苗生长试验 | 第22-23页 |
2.4 讨论 | 第23-24页 |
第三章 毛竹Ph GID1、Ph GID2、Ph SLR1基因的克隆及在笋快速生长过程中的表达分析 | 第24-40页 |
3.1 材料和试剂 | 第24-25页 |
3.1.1 植物材料 | 第24页 |
3.1.2 菌种和载体 | 第24页 |
3.1.3 化学试剂和培养基 | 第24页 |
3.1.4 实验仪器 | 第24-25页 |
3.2 试验方法 | 第25-30页 |
3.2.1 基因克隆方法 | 第25-26页 |
3.2.2 Trizol法提取毛竹幼苗总RNA | 第26页 |
3.2.3 毛竹笋总RNA提取(CTAB+Trizol法) | 第26-27页 |
3.2.4 RNA反转录为cDNA | 第27-28页 |
3.2.5 目的片段的克隆 | 第28页 |
3.2.6 目的片段胶回收与TA克隆 | 第28-29页 |
3.2.7 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第29页 |
3.2.8 连接产物转化大肠杆菌 | 第29页 |
3.2.9 鉴定阳性克隆 | 第29-30页 |
3.2.10 序列的生物信息学分析 | 第30页 |
3.2.11 实时定量PCR分析 | 第30页 |
3.3 结果与分析 | 第30-38页 |
3.3.1 毛竹苗总RNA提取结果 | 第30-31页 |
3.3.2 PhGID1、PhGID2、PhSLR1基因克隆 | 第31-32页 |
3.3.3 PhGID1、PhGID2、PhSLR1基因序列分析 | 第32-37页 |
3.3.4 三个基因在毛竹笋快速生长时期的表达分析 | 第37-38页 |
3.4 讨论 | 第38-40页 |
第四章 PhGID1、PhGID2和PhSLR1蛋白的原核表达与互作分析 | 第40-53页 |
4.1 试验材料 | 第40-41页 |
4.1.1 菌株和质粒 | 第40页 |
4.1.2 试剂 | 第40页 |
4.1.3 引物设计与合成 | 第40-41页 |
4.2 试验方法 | 第41-45页 |
4.2.1 原核表达载体的构建 | 第41页 |
4.2.2 蛋白质的原核表达 | 第41-42页 |
4.2.3 酵母双杂交重组载体的构建 | 第42-43页 |
4.2.4 酵母感受态细胞的制备—LiAc法 | 第43页 |
4.2.5 重组载体转化酵母感受态细胞 | 第43-44页 |
4.2.6 酵母双杂交系统阴性对照实验 | 第44页 |
4.2.7 酵母双杂交实验 | 第44-45页 |
4.3 结果与分析 | 第45-51页 |
4.3.1 原核表达载体构建 | 第45-46页 |
4.3.2 原核表达结果 | 第46-48页 |
4.3.3 酵母双杂交载体构建 | 第48-50页 |
4.3.4 酵母双杂交结果 | 第50-51页 |
4.4 讨论 | 第51-53页 |
第五章 PhSLR1转基因实验 | 第53-60页 |
5.1 实验材料 | 第53页 |
5.1.1 植物材料 | 第53页 |
5.1.2 载体与菌株 | 第53页 |
5.1.3 试剂耗材 | 第53页 |
5.2 试验方法 | 第53-59页 |
5.2.1 转基因载体构建 | 第53-56页 |
5.2.1.1 转基因用PhSLR1基因的克隆 | 第53-54页 |
5.2.1.2 目的片段胶回收 | 第54页 |
5.2.1.3 目的片段末端加A(腺嘌呤)和产物纯化 | 第54-55页 |
5.2.1.4 回收片段连接到pMD19-T(simple) | 第55页 |
5.2.1.5 连接产物转化大肠杆菌 | 第55页 |
5.2.1.6 鉴定阳性克隆 | 第55页 |
5.2.1.7 构建转基因载体 | 第55-56页 |
5.2.2 重组载体的转化 | 第56-57页 |
5.2.2.1 热激法制备农杆菌感受态 | 第56-57页 |
5.2.2.2 转化农杆菌感受态 | 第57页 |
5.2.2.3 阳性转化子的鉴定 | 第57页 |
5.2.3 农杆菌侵染拟南芥 | 第57-59页 |
5.2.3.1 野生型拟南芥的种植 | 第57-58页 |
5.2.3.2 农杆菌侵染开花拟南芥 | 第58页 |
5.2.3.3 筛选鉴定转基因植株 | 第58-59页 |
5.3 结果与分析 | 第59-60页 |
5.3.1 转基因载体的构建 | 第59页 |
5.3.2 转基因植株的筛选与表型观察 | 第59-60页 |
5.4 讨论 | 第60页 |
第六章 结论和展望 | 第60-62页 |
6.1 结论 | 第60-61页 |
6.2 展望 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-68页 |
个人简介 | 第68页 |
在校论文发表情况 | 第68-69页 |
致谢 | 第69页 |