摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
引言 | 第10-11页 |
1 文献综述 | 第11-22页 |
1.1 植物细胞壁中纤维素的生物合成酶系及分子机制 | 第11-19页 |
1.1.1 纤维素的合成 | 第11页 |
1.1.2 纤维素合成酶基因的结构 | 第11-12页 |
1.1.3 纤维素合成酶基因的命名和种类 | 第12-13页 |
1.1.4 纤维素合成酶结构与功能 | 第13-14页 |
1.1.5 纤维素合成酶的转录调控因子及共表达基因 | 第14页 |
1.1.6 其他因素对纤维合成酶表达的影响 | 第14-16页 |
1.1.7 细胞壁中纤维素及其他多糖的合成 | 第16页 |
1.1.8 纤维素及其他多糖的分子合成机制 | 第16-18页 |
1.1.9 次生壁生物合成相关基因的调控 | 第18-19页 |
1.2 研究目的及意义 | 第19页 |
1.3 立题依据 | 第19-20页 |
1.4 技术路线 | 第20-22页 |
2 毛竹茎秆结构的显微和超微观察 | 第22-29页 |
2.1 材料和方法 | 第22-24页 |
2.1.1 采样准备 | 第22页 |
2.1.2 样品采集和处理 | 第22-23页 |
2.1.3 光镜制片及显微观察 | 第23-24页 |
2.1.4 透射电镜制片及超微观察 | 第24页 |
2.2 结果与分析 | 第24-27页 |
2.2.1 毛竹幼竹茎干组织显微观察 | 第24-25页 |
2.2.2 毛竹幼竹茎秆细胞壁超微结构的观察 | 第25-27页 |
2.3 讨论 | 第27-29页 |
3 毛竹纤维素合成酶基因的生物信息学分析 | 第29-35页 |
3.1 材料和方法 | 第29-30页 |
3.1.1 序列 | 第29页 |
3.1.2 毛竹纤维素合成酶超家族基因获得和分析 | 第29页 |
3.1.3 毛竹纤维素合成酶蛋白的性质分析和系统进化树构建 | 第29-30页 |
3.2 结果与分析 | 第30-33页 |
3.2.1 纤维合成酶家族基因的基本特点 | 第30-31页 |
3.2.2 纤维素合成酶家族基因聚类分析 | 第31-32页 |
3.2.3 毛竹、拟南芥、水稻纤维素合成酶家族基因的分析 | 第32-33页 |
3.2.4 纤维素合成酶超家族基因聚类分析 | 第33页 |
3.3 讨论 | 第33-35页 |
4 毛竹纤维素合成酶基因在转录和翻译水平的表达 | 第35-55页 |
4.1 材料和方法 | 第35-47页 |
4.1.1 RNA的提取与检测 | 第35-36页 |
4.1.2 cDNA的制备与检测 | 第36页 |
4.1.3 定量引物设计及筛选 | 第36-37页 |
4.1.4 定量片段的克隆和测序 | 第37-39页 |
4.1.5 qRT-PCR | 第39-40页 |
4.1.6 2~(-△△)Ct的方法处理定量数据 | 第40-41页 |
4.1.7 植物蛋白的提取和浓度测定 | 第41页 |
4.1.8 蛋白质电泳和Western Blot | 第41-43页 |
4.1.8.1 蛋白质电泳 | 第41-42页 |
4.1.8.2 Western Blot | 第42-43页 |
4.1.9 石蜡切片制备和原位杂交 | 第43-47页 |
4.1.9.1 石蜡切片制备 | 第43-44页 |
4.1.9.2 探针的制备 | 第44-45页 |
4.1.9.3 探针的斑点杂交检测浓度 | 第45-46页 |
4.1.9.4 杂交与显色 | 第46-47页 |
4.1.9.5 漂洗、显色及镜检 | 第47页 |
4.2 结果与分析 | 第47-54页 |
4.2.1 RNA质量检测及反转录后cDNA扩增 | 第47-49页 |
4.2.2 纤维素合成酶基因的定量表达 | 第49-51页 |
4.2.3 植物蛋白Western Blot检测 | 第51-52页 |
4.2.4 石蜡切片及RNA原位杂交 | 第52-54页 |
4.3 讨论 | 第54-55页 |
5 毛竹纤维素合成酶的原核表达和真核表达系统的建立 | 第55-62页 |
5.1 毛竹纤维素合成酶基因的原核表达 | 第55-57页 |
5.1.1 表达片段的筛选 | 第55页 |
5.1.2 MosC表达载体构建 | 第55-57页 |
5.1.3 MosC蛋白的原核表达及检测 | 第57页 |
5.2 真核表达系统的建立 | 第57-59页 |
5.2.1 细胞的复苏 | 第57-58页 |
5.2.2 细胞的传代 | 第58页 |
5.2.2.1 贴壁培养 | 第58页 |
5.2.2.2 悬浮培养 | 第58页 |
5.2.3 细胞冻存 | 第58-59页 |
5.3 结果与分析 | 第59-61页 |
5.3.1 MosC(Cellulose-synt)片段的表达及验证 | 第59-60页 |
5.3.2 sf9昆虫培养 | 第60-61页 |
5.4 讨论 | 第61-62页 |
6 结论与展望 | 第62-64页 |
参考文献 | 第64-69页 |
个人简介 | 第69页 |
在校期间发表论文情况 | 第69-70页 |
致谢 | 第70页 |