| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 琥珀酸 | 第10-12页 |
| 1.1.1 琥珀酸的理化性质和用途 | 第10页 |
| 1.1.2 琥珀酸的合成 | 第10-11页 |
| 1.1.3 CO_2对琥珀酸合成的影响 | 第11-12页 |
| 1.2 启动子工程 | 第12-19页 |
| 1.2.1 启动子的基本结构 | 第12-13页 |
| 1.2.2 启动子工程的改造策略及应用 | 第13-18页 |
| 1.2.2.1 非保守序列随机化 | 第13-15页 |
| 1.2.2.2 易错PCR | 第15-16页 |
| 1.2.2.3 杂合启动子工程 | 第16-17页 |
| 1.2.2.4 理性设计TFBSs | 第17页 |
| 1.2.2.5 能量矩阵 | 第17-18页 |
| 1.2.2.6 启动子与RBS杂合 | 第18页 |
| 1.2.3 启动子工程的发展方向 | 第18-19页 |
| 1.3 本论文研究背景和研究内容 | 第19-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 实验菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 培养基 | 第25页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-40页 |
| 2.2.1 引物设计和基因测序 | 第26页 |
| 2.2.2 PCR反应体系 | 第26-28页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.2.4 DNA片段的切胶回收 | 第28-29页 |
| 2.2.5 DNA片段的纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.6 DNA片段的酶切 | 第30页 |
| 2.2.7 DNA片段的连接 | 第30-31页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第31页 |
| 2.2.10 大肠杆菌质粒的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.11 红色荧光蛋白的检测 | 第32-33页 |
| 2.2.12 大肠杆菌RNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.13 大肠杆菌RNA的反转录 | 第34-35页 |
| 2.2.14 RT-qPCR反应 | 第35-36页 |
| 2.2.15 氯霉素抑菌浓度的检测 | 第36页 |
| 2.2.16 发酵培养 | 第36-37页 |
| 2.2.17 菌株生长的测定 | 第37页 |
| 2.2.18 葡萄糖的测定 | 第37页 |
| 2.2.19 琥珀酸的检测 | 第37-38页 |
| 2.2.20 细胞粗酶液的制备 | 第38页 |
| 2.2.21 粗酶液中总蛋白的测定 | 第38页 |
| 2.2.22 酶活的测定 | 第38-40页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第40-69页 |
| 3.1 启动子文库的构建 | 第40-42页 |
| 3.2 启动子文库的特性描述 | 第42-53页 |
| 3.2.1 以rfp作为报告基因对启动子文库的特性描述 | 第43-49页 |
| 3.2.1.1 pT-P_x-rfp构建 | 第43-45页 |
| 3.2.1.2 红色荧光蛋白的检测(翻译水平分析) | 第45-46页 |
| 3.2.1.3 Rfp的转录表征(转录水平分析) | 第46-48页 |
| 3.2.1.4 Rfp的转录水平与翻译水平相关性分析 | 第48页 |
| 3.2.1.5 Rfp的转录水平与能量值相关性分析 | 第48-49页 |
| 3.2.2 以cat作为报告基因对启动子文库的特性描述 | 第49-53页 |
| 3.2.2.1 pT-P_x-cat的构建 | 第49-51页 |
| 3.2.2.2 氯霉素抑菌浓度的检测 | 第51-52页 |
| 3.2.2.3 Rfp和cat两种报告基因的翻译水平相关性分析 | 第52-53页 |
| 3.3 启动子文库在琥珀酸合成中的应用 | 第53-69页 |
| 3.3.1 双质粒系统的构建 | 第53-57页 |
| 3.3.1.1 pT-P_x-bicA, pT-P_x-sbt A, pT-P_x-pck, pT-P_x-ppc的构建 | 第53-54页 |
| 3.3.1.2 pACYC-P_x-pck, p ACYC-P_x-ppc的构建 | 第54-55页 |
| 3.3.1.3 pT-P_x-bicA-P_x-sbt A构建 | 第55-56页 |
| 3.3.1.4 pACYC-P_x-pck-P_x-ppc构建 | 第56-57页 |
| 3.3.2 单转运单固定的组合方式对琥珀酸产量的影响 | 第57-63页 |
| 3.3.2.1 sbt A与pck的组合方式对琥珀酸产量的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.2.2 sbt A与ppc的组合方式对琥珀酸产量的影响 | 第60-61页 |
| 3.3.2.3 bicA与pck的组合方式对琥珀酸产量的影响 | 第61-62页 |
| 3.3.2.4 bicA与ppc的组合方式对琥珀酸产量的影响 | 第62-63页 |
| 3.3.3 筛选的单转运单固定组合方式的分批补料发酵 | 第63-66页 |
| 3.3.4 优化的双转运双固定组合方式的分批补料发酵 | 第66-69页 |
| 第四章 结论与展望 | 第69-71页 |
| 4.1 实验结论 | 第69-70页 |
| 4.2 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
