| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 白蚁 | 第12-13页 |
| 1.1.1 白蚁概述 | 第12页 |
| 1.1.2 黄翅大白蚁 | 第12-13页 |
| 1.2 漆酶 | 第13-19页 |
| 1.2.1 漆酶概述 | 第13-14页 |
| 1.2.2 漆酶的分布及体内功能 | 第14页 |
| 1.2.3 白蚁漆酶研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.4 白蚁肠道共生细菌漆酶的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3 白蚁及其肠道微生物木质纤维素酶的协同作用研究 | 第19-22页 |
| 1.3.1 白蚁及其共生微生物木质纤维素降解酶异源表达研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.2 木质纤维素降解酶协同作用研究及共表达研究 | 第21-22页 |
| 1.4 本文的立题依据和研究内容 | 第22-25页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第22-23页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 黄翅大白蚁来源的漆酶基因MbLac的克隆与表达 | 第25-42页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料、试剂及仪器 | 第25页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.2.2 实验试剂与仪器设备 | 第25页 |
| 2.3 实验方法与步骤 | 第25-32页 |
| 2.3.1 MbLac的序列分析 | 第25-26页 |
| 2.3.2 MbLlac基因的克隆 | 第26-27页 |
| 2.3.3 荧光定量PCR检测MbLac在黄翅大白蚁肠道各部分的表达情况 | 第27页 |
| 2.3.4 MbLac在E.coli JM109中的表达 | 第27-28页 |
| 2.3.5 MbLac在E.coli BL21中的表达 | 第28-30页 |
| 2.3.6 MbLac在Pichia pastoris GS115中的表达 | 第30-31页 |
| 2.3.7 重组MbLac酶活的测定 | 第31-32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-40页 |
| 2.4.1 MbLac的生物信息学分析 | 第32-34页 |
| 2.4.2 RT-PCR和qPCR检测MbLac的表达位置 | 第34-35页 |
| 2.4.3 漆酶基因MbLac的克隆及其在E.coli JM109中的表达 | 第35-36页 |
| 2.4.4 MbLac在E.coli BL21中的融合表达 | 第36-38页 |
| 2.4.5 MbLac在毕赤酵母中的分泌表达 | 第38-40页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 黄翅大白蚁后肠芽孢杆菌来源的漆酶基因的异源表达与功能分析 | 第42-56页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料、试剂及仪器 | 第42页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第42页 |
| 3.2.2 实验试剂及仪器 | 第42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-46页 |
| 3.3.1 B-CMC-2基因组的提取 | 第42-43页 |
| 3.3.2 B-CMC-2系统进化分析 | 第43页 |
| 3.3.3 B-CMC-2漆酶活性的检测 | 第43页 |
| 3.3.4 B-CMC-2来源的漆酶基因CotA全长的获得 | 第43-44页 |
| 3.3.5 CotA基因在黄翅大白蚁肠道中的定位 | 第44页 |
| 3.3.6 pQE30-CotA载体的构建 | 第44页 |
| 3.3.7 CotA在E.coli JM109中的表达 | 第44页 |
| 3.3.8 重组蛋白酶活性分析 | 第44-46页 |
| 3.4 实验结果 | 第46-54页 |
| 3.4.1 B-CMC-2的系统进化分析及漆酶酶活的测定 | 第46-47页 |
| 3.4.2 漆酶基因CotA的克隆与重组表达载体的构建 | 第47-49页 |
| 3.4.3 漆酶基因CotA在白蚁肠道中的存在性验证 | 第49页 |
| 3.4.4 重组漆酶CotA在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第49页 |
| 3.4.5 重组蛋白酶学性质鉴定 | 第49-54页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 黄翅大白蚁后肠细菌来源木聚糖酶基因在大肠杆菌JM109中的表达 | 第56-61页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料、试剂与仪器 | 第56页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第56页 |
| 4.2.2 实验试剂与仪器 | 第56页 |
| 4.3 实验方法与步骤 | 第56-57页 |
| 4.3.1 克隆基因与构建载体 | 第56-57页 |
| 4.3.2 XylMb1在E.coi JM109中的诱导表达 | 第57页 |
| 4.3.3 重组蛋白酶活力的测定 | 第57页 |
| 4.4 实验结果 | 第57-59页 |
| 4.4.1 基因克隆与表达载体pQE30-Xy1Mb1的构建 | 第57-58页 |
| 4.4.2 XylMb1在E.coli JM109中的表达与纯化 | 第58-59页 |
| 4.4.3 XylMb1重组蛋白酶学性质分析 | 第59页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 白蚁及其共生微生物来源的木质纤维素酶的协同作用 | 第61-71页 |
| 5.1 引言 | 第61页 |
| 5.2 实验材料、试剂与仪器 | 第61页 |
| 5.2.1 菌株和质粒 | 第61页 |
| 5.2.2 实验试剂与器材 | 第61页 |
| 5.3 实验方法与步骤 | 第61-64页 |
| 5.3.1 构建表达载体pETDuet-1-BGDS5-EG71 | 第61-63页 |
| 5.3.2 BGDS-5和EG71在E.coli BL21中的表达 | 第63页 |
| 5.3.3 葡萄糖标准曲线的测定 | 第63页 |
| 5.3.4 酶活性的测定方法 | 第63-64页 |
| 5.3.5 白蚁及其后肠微生物来源的木质纤维素酶的协同作用研究 | 第64页 |
| 5.4 实验结果 | 第64-69页 |
| 5.4.1 pETDuet-1-BGDS5-EG71的构建 | 第64-65页 |
| 5.4.2 BGDS-5和EG71在E.coli BL21中的表达 | 第65-66页 |
| 5.4.3 葡萄糖标准曲线的绘制 | 第66页 |
| 5.4.4 共表达的EG71和BGDS5混合物纤维素酶活的测定 | 第66-67页 |
| 5.4.5 白蚁及其微生物来源木质纤维素酶的协同作用 | 第67-69页 |
| 5.5 小结与讨论 | 第69-71页 |
| 第六章 总结与展望 | 第71-73页 |
| 附录 | 第73-86页 |
| 附录一 本文所用试剂与仪器设备 | 第73-75页 |
| 附录二 本文所用主要溶液配方 | 第75-77页 |
| 附录三 本文所用培养基配方 | 第77-79页 |
| 附录四 Pichiapastoris GS115感受态细胞的制备以及电转化的方法 | 第79-80页 |
| 附录五 细菌基因组提取步骤 | 第80-81页 |
| 附录六 MbLac全长序列(2633 bp) | 第81-83页 |
| 附录七 CotA序列全长(1533 bp) | 第83-85页 |
| 附录八 XylMb1序列 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第96-97页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第97页 |
