| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| ·各XRNs的功能 | 第10-16页 |
| ·酵母XRN1的功能 | 第10-13页 |
| ·XRN2与XRN3的功能分析 | 第13-14页 |
| ·XRN4的功能研究 | 第14-16页 |
| ·本文研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-34页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·试剂 | 第17页 |
| ·仪器 | 第17页 |
| ·植物材料 | 第17-18页 |
| ·菌株及载体 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-22页 |
| ·Trizol法提取总水稻总RNA | 第18-19页 |
| ·DNaseI处理RNA样品,除去基因组的DNA | 第19-20页 |
| ·反转录合成cDNA第一条链 | 第20页 |
| ·基因扩增 | 第20-21页 |
| ·PCR产物的切胶纯化 | 第21-22页 |
| ·克隆载体的构建 | 第22-24页 |
| ·PCR产物与pGEM-T载体的连接 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第22页 |
| ·转化 | 第22-23页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第23-24页 |
| ·双元表达载体的构建 | 第24-26页 |
| ·质粒的提取 | 第24-25页 |
| ·质粒的粗提 | 第25页 |
| ·酶切与回收目的基因和表达载体片段 | 第25页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第25-26页 |
| ·目的基因在烟草中的瞬时表达 | 第26-31页 |
| ·转化农杆菌 | 第26-27页 |
| ·农杆菌共浸润烟草 | 第27-28页 |
| ·OsXRN4/NbXRN4的表达对病毒RNA的影响检测 | 第28-31页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第31-34页 |
| ·转基因用MS培养基配方 | 第31页 |
| ·植物激素的配制 | 第31-32页 |
| ·转基因植株的检测 | 第32-34页 |
| 第三章 NbXRN4沉默促进TMV增殖的研究 | 第34-39页 |
| ·材料与方法 | 第34-38页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·所用引物 | 第34-35页 |
| ·载体的构建 | 第35页 |
| ·农杆菌瞬时转染烟草 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 水稻XRN4(OsXRN4)功能研究 | 第39-51页 |
| ·材料与方法 | 第39-42页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·OsXRN4的克隆 | 第39页 |
| ·载体构建策略 | 第39-41页 |
| ·农杆菌瞬时转染烟草 | 第41页 |
| ·OsXRN4对烟草的遗传转化 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-49页 |
| ·OsXRN4克隆与序列分析 | 第42-44页 |
| ·OsXRN4的真核表达载体构建 | 第44-45页 |
| ·OsXRN4的定位分析 | 第45-46页 |
| ·OsXRN4的局部表达对TMV复制的影响 | 第46-48页 |
| ·转OsXRN4基因烟草的获得与检测 | 第48-49页 |
| ·阳性转基因烟草的抗病性检测对TMV侵染的影响 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 烟草未知蛋白(Nbun)对TMV侵染的影响 | 第51-59页 |
| ·材料与方法 | 第52-55页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·核仁定位信号分析 | 第52-53页 |
| ·与TMV各蛋白的互作分析 | 第53-55页 |
| ·农杆菌瞬时转染烟草 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-57页 |
| ·Nbun蛋白核仁定位信号分析 | 第55-56页 |
| ·TMV各编码蛋白与Nbun之间的互作 | 第56-57页 |
| ·Nbun沉默后对TMV侵染的影响 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第六章 结论与展望 | 第59-60页 |
| ·结论 | 第59页 |
| ·展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第65-66页 |