| 摘要 | 第1-15页 |
| Abstract | 第15-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-39页 |
| ·来自环境的因素对链霉菌次级代谢过程的调控 | 第17-19页 |
| ·碳源对链霉菌次级代谢的调控作用 | 第17页 |
| ·氮源对链霉菌次级代谢的调控作用 | 第17-18页 |
| ·磷酸盐及PhoR-PhoP二元件对链霉菌次级代谢的调控作用 | 第18-19页 |
| ·来自菌体自身的因素对链霉菌次级代谢过程的调控 | 第19-26页 |
| ·ppGpp在链霉菌次级代谢起始中的作用 | 第19-20页 |
| ·σ因子对链霉菌次级代谢的调控 | 第20页 |
| ·γ-丁内酯类调控子 | 第20-22页 |
| ·基因组中调控基因编码的调控子 | 第22-26页 |
| ·多烯大环内酯类抗生素 | 第26-30页 |
| ·多烯大环内酯类抗生素简介 | 第26-28页 |
| ·多烯大环内酯类抗生素生物合成过程 | 第28-30页 |
| ·来自于基因簇内调控子对多烯大环内酯类抗生素生物合成的调控 | 第30-33页 |
| ·匹马霉素生物合成的调控 | 第31-32页 |
| ·制霉菌素生物合成的调控 | 第32页 |
| ·FR-008生物合成的调控 | 第32-33页 |
| ·调控基因的研究方法 | 第33-37页 |
| ·基因阻断、回补、增加拷贝数和异源表达 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR和qRT-PCR | 第34-35页 |
| ·xyIE报告系统 | 第35页 |
| ·Electrophoretic mobility shift assays(EMSA) | 第35-36页 |
| ·DNaseⅠFootprinting Assary | 第36-37页 |
| ·研究四霉素生物合成基因簇中调控基因的立题意义 | 第37-39页 |
| 第二章 材料与方法 | 第39-53页 |
| ·实验材料 | 第39-44页 |
| ·菌种和质粒 | 第39-40页 |
| ·培养基 | 第40-41页 |
| ·试剂 | 第41-42页 |
| ·缓冲液 | 第42-43页 |
| ·仪器 | 第43-44页 |
| ·引物 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-53页 |
| ·链霉菌总DNA提取 | 第44-45页 |
| ·PCR体系及条件 | 第45页 |
| ·T载体连接 | 第45页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳条件 | 第45页 |
| ·胶回收 | 第45-46页 |
| ·大肠埃希菌感受态制备 | 第46页 |
| ·质粒DNA转化大肠埃希菌 | 第46页 |
| ·大肠埃希菌质粒提取 | 第46页 |
| ·接合转移 | 第46-47页 |
| ·发酵 | 第47页 |
| ·发酵液处理 | 第47页 |
| ·生物活性检测 | 第47页 |
| ·产物HPLC分析 | 第47页 |
| ·生长曲线的测定 | 第47-48页 |
| ·反转录PCR | 第48-49页 |
| ·His_6-tag蛋白表达 | 第49-50页 |
| ·His_6-tag蛋白的纯化 | 第50页 |
| ·EMSA分析 | 第50-53页 |
| 第三章 四霉素产物峰的定位以及ttmR基因的生物信息学分析 | 第53-59页 |
| ·不吸水链霉菌发酵产物中主要多烯大环内酯类产物的确证 | 第53-54页 |
| ·ttmR生物信息学分析 | 第54-59页 |
| ·系统发育树分析 | 第55-56页 |
| ·氨基酸序列对比 | 第56页 |
| ·蛋白质二级结构模拟 | 第56-57页 |
| ·生物信息学分析结论 | 第57-59页 |
| 第四章 四霉素生物合成基因簇中ttmRⅠ基因功能的确定 | 第59-77页 |
| ·ttmRⅠ阻断株的获得及产物分析 | 第59-62页 |
| ·ttmRⅠ阻断质粒的构建 | 第59-60页 |
| ·ttmRⅠ基因单交换阻断菌株的获得 | 第60页 |
| ·ttmRⅠ基因双交换阻断菌株的获得 | 第60-62页 |
| ·ttmRⅠ回补及表达 | 第62-67页 |
| ·ttmRⅠ回补质粒的构建 | 第62-64页 |
| ·ttmRⅠ阻断株的回补 | 第64-65页 |
| ·ttmRⅠ在不吸水链霉菌H42中的表达 | 第65-67页 |
| ·ttmRⅠ基因阻断对生长曲线及菌落分化的影响 | 第67-68页 |
| ·△ttmRⅠ菌株生长曲线 | 第67-68页 |
| ·ttmRⅠ阻断株及回补菌株孢子变化 | 第68页 |
| ·△ttmRⅠ菌株中四霉素生物合成基因簇内基因表达分析 | 第68-71页 |
| ·固体发酵抗生素产量-时间曲线的测定 | 第68-69页 |
| ·△ttmRⅠ固体发酵及总RNA提取 | 第69页 |
| ·通过RT-PCR分析四霉素合成基因簇中基因转录情况 | 第69-70页 |
| ·通过RT-PCR分析△ttmRⅠ中基因转录情况 | 第70-71页 |
| ·TtmRⅠ_(DBD)在大肠埃希菌中的表达及分离纯化 | 第71-73页 |
| ·TtmRⅠ_(DBD)表达质粒的构建 | 第71-72页 |
| ·TtmRⅠ_(DBD)表达条件的考察 | 第72-73页 |
| ·TtmRⅠ_(DBD)的分离纯化 | 第73页 |
| ·TtmRⅠ与各基因启动子间的作用 | 第73-74页 |
| ·小结与讨论 | 第74-77页 |
| 第五章 四霉素生物合成基因簇中ttmRⅡ基因功能的确定 | 第77-91页 |
| ·ttmRⅡ阻断株的获得及产物分析 | 第77-79页 |
| ·ttmRⅡ阻断质粒的构建 | 第77-78页 |
| ·ttmRⅡ基因单交换阻断菌株的获得 | 第78页 |
| ·ttmRⅡ基因双交换阻断菌株的获得 | 第78-79页 |
| ·ttmRⅡ回补及表达 | 第79-83页 |
| ·ttmRⅡ回补质粒的构建 | 第79-80页 |
| ·ttmRⅡ阻断株的回补 | 第80-81页 |
| ·ttmRⅡ在不吸水链霉菌H42中的表达 | 第81-83页 |
| ·ttmRⅡ基因阻断对生长曲线及菌落分化的影响 | 第83-84页 |
| ·△ttmRⅡ菌株生长曲线 | 第83页 |
| ·ttmRⅡ阻断株及回补菌株孢子变化 | 第83-84页 |
| ·△ttmRⅡ菌株中四霉素生物合成基因簇内基因表达分析 | 第84-85页 |
| ·TtmRⅡ_(DBD)在大肠埃希菌中的表达及分离纯化 | 第85-87页 |
| ·TtmRⅡ_(DBD)表达质粒的构建 | 第85-86页 |
| ·TtmRⅡ_(DBD)表达条件的考察 | 第86-87页 |
| ·TtmRⅡ_(DBD)的分离纯化 | 第87页 |
| ·TtmRⅡ与各基因启动子间的作用 | 第87-88页 |
| ·小结与讨论 | 第88-91页 |
| 第六章 四霉素生物合成基因簇中ttmRⅢ基因功能的确定 | 第91-105页 |
| ·ttmRⅢ阻断株的获得及产物分析 | 第91-94页 |
| ·ttmRⅢ阻断质粒的构建 | 第91-92页 |
| ·ttmRⅢ基因单交换阻断菌株的获得 | 第92-93页 |
| ·ttmRⅢ基因双交换阻断菌株的获得 | 第93-94页 |
| ·ttmRⅢ回补及表达 | 第94-97页 |
| ·ttmRⅢ回补质粒的构建 | 第94-95页 |
| ·ttmRⅢ阻断株的回补 | 第95-96页 |
| ·ttmRⅢ在不吸水链霉菌H42中的表达 | 第96-97页 |
| ·ttmRⅢ基因阻断对生长曲线及菌落分化的影响 | 第97-98页 |
| ·△ttmRⅢ菌株生长曲线 | 第97-98页 |
| ·ttmRⅢ阻断株及回补菌株孢子变化 | 第98页 |
| ·△ttmRⅢ菌株中四霉素生物合成基因簇中基因表达分析 | 第98-99页 |
| ·TtmRⅢ_(DBD)在大肠埃希菌中的表达及分离纯化 | 第99-101页 |
| ·TtmRⅢ_(DBD)表达质粒的构建 | 第99-100页 |
| ·TtmRⅢ_(DBD)表达条件考察 | 第100-101页 |
| ·TtmRⅢ(DBD)的分离纯化 | 第101页 |
| ·TtmRⅢ与各基因启动子间的作用 | 第101-102页 |
| ·小结与讨论 | 第102-105页 |
| 第七章 四霉素生物合成基因簇中ttmRⅣ基因功能的确定 | 第105-119页 |
| ·ttmRⅣ阻断株的获得及产物分析 | 第105-108页 |
| ·ttmRⅣ阻断质粒的构建 | 第105-106页 |
| ·ttmRⅣ基因单交换阻断菌株的获得 | 第106-107页 |
| ·ttmRⅣ基因双交换阻断菌株的获得 | 第107-108页 |
| ·ttmRⅣ回补及表达 | 第108-110页 |
| ·ttmRⅣ回补质粒的构建 | 第108-109页 |
| ·ttmRⅣ阻断株的回补 | 第109页 |
| ·ttmRⅣ在不吸水链霉菌H42中的表达 | 第109-110页 |
| ·ttmRⅣ基因阻断对生长曲线及菌落分化的影响 | 第110-111页 |
| ·△ttmRⅣ菌株生长曲线 | 第110-111页 |
| ·ttmRⅣ阻断株及回补菌株孢子的变化 | 第111页 |
| ·△ttmRⅣ菌株中四霉素生物合成基因转录情况分析 | 第111-112页 |
| ·TtmRⅣ在大肠埃希菌中的表达及分离纯化 | 第112-114页 |
| ·Trx-TtmRⅣ表达质粒的构建 | 第112-113页 |
| ·Trx-TtmRⅣ表达条件考察 | 第113页 |
| ·Trx-TtmRⅣ的分离纯化 | 第113-114页 |
| ·Trx的表达及分离纯化 | 第114页 |
| ·TtmRⅣ与各基因启动子间的作用 | 第114-115页 |
| ·TtmRⅣ结合位点预测 | 第115-116页 |
| ·小结与讨论 | 第116-119页 |
| 第八章 全文总结 | 第119-123页 |
| ·ttmRⅠ、ttmRⅡ、ttmRⅢ、ttmRⅣ阻断株中四霉素产量变化的比较 | 第119-120页 |
| ·ttmRⅠ、ttmRⅡ、ttmRⅢ、ttmRⅣ回补及表达菌株中四霉素产量变化的比较 | 第120-121页 |
| ·ttmRⅠ、ttmRⅡ、ttmRⅢ、ttmRⅣ回补菌株中四霉素产量变化的比较 | 第120页 |
| ·ttmRⅠ、ttmRⅡ、ttmRⅢ、ttmRⅣ表达菌株中四霉素产量变化的比较 | 第120-121页 |
| ·讨论 | 第121-123页 |
| 第九章 全文结论 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-133页 |
| 附录 | 第133-141页 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 | 第141-143页 |
| 致谢 | 第143-144页 |
| 附件 | 第144-154页 |
| 附表 | 第154页 |
