| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-17页 |
| 前言 | 第17-24页 |
| 参考文献 | 第21-24页 |
| 第一部分：ARHI基因在人骨肉瘤细胞及正常成骨细胞中的表达及意义 | 第24-41页 |
| 1.材料与方法 | 第25-36页 |
| ·实验材料和仪器 | 第25-30页 |
| ·药品和试剂 | 第25-27页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第27-29页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-36页 |
| ·实验细胞培养 | 第30-31页 |
| ·ARHI m RNA RT-PCR实验 | 第31-33页 |
| ·ARHI蛋白Western blot杂交检测 | 第33-36页 |
| ·统计学分析 | 第36页 |
| 2.结果 | 第36-38页 |
| ·成骨细胞h FOB1.19 及骨肉瘤细胞中ARHI m RNA的表达 | 第36页 |
| ·成骨细胞h FOB1.19 及骨肉瘤细胞中ARHI蛋白的表达 | 第36-38页 |
| 3.讨论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-41页 |
| 第二部分：ARHI基因转染骨肉瘤细胞阳性克隆稳定株的构建及鉴定 | 第41-66页 |
| 1.材料与方法 | 第41-56页 |
| ·实验材料和仪器 | 第41-47页 |
| ·药品和试剂 | 第43-45页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第45-46页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-56页 |
| ·细胞培养 | 第47页 |
| ·ARHI基因真核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·PCR扩增目地基因ARHI | 第48-50页 |
| ·pc DNA3.1-ARHI质粒的构建 | 第50-52页 |
| ·pc DNA3.1-ARHI及pc DNA3.1 质粒的大量制备 | 第52-53页 |
| ·基因转染 | 第53-55页 |
| ·稳定转染骨肉瘤细胞株的鉴定 | 第55-56页 |
| ·统计学分析 | 第56页 |
| 2.结果 | 第56-60页 |
| ·重组质粒pc DNA3.1-ARHI的构建和鉴定 | 第56-57页 |
| ·重组质粒pc DNA3.1-ARHI | 第56页 |
| ·目的基因ARHI的鉴定 | 第56-57页 |
| ·重组质粒pc DNA3.1-ARHI酶切鉴定 | 第57页 |
| ·重组质粒pc DNA3.1-ARHI测序结果 | 第57页 |
| ·质粒pc DNA3.1 和重组质粒pc DNA3.1-ARHI转染骨肉瘤细胞株及稳定株筛选 | 第57-58页 |
| ·稳定转染细胞株中ARHI基因和蛋白的表达 | 第58-60页 |
| ·RT -PCR鉴定ARHI基因m RNA表达 | 第58页 |
| ·Western blot杂交鉴定ARHI基因蛋白表达 | 第58-60页 |
| 3.讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 第三部分：ARHI基因调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭迁移的体外研究 | 第66-83页 |
| 1.材料与方法 | 第66-71页 |
| ·实验材料和仪器 | 第66-69页 |
| ·药品和试剂 | 第66-67页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第67页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第67-69页 |
| ·实验方法 | 第69-71页 |
| ·细胞活性和细胞增殖检测 | 第69-70页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第70页 |
| ·细胞侵袭、迁移检测 | 第70-71页 |
| ·统计学分析 | 第71页 |
| 2.结果 | 第71-77页 |
| ·稳定转染骨肉瘤细胞株的增殖检测 | 第71-75页 |
| ·稳定转染骨肉瘤细胞株的生长曲线 | 第71-72页 |
| ·MTT比色法检测ARHI基因对骨肉瘤细胞增殖的影响 | 第72-75页 |
| ·ARHI基因对骨肉瘤细胞凋亡的影响 | 第75-76页 |
| ·ARHI基因对骨肉瘤细胞侵袭、迁移能力的影响 | 第76-77页 |
| ·ARHI基因对骨肉瘤细胞侵袭能力的影响 | 第76页 |
| ·ARHI基因对骨肉瘤细胞迁移能力的影响 | 第76-77页 |
| 3.讨论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
| 第四部分:小干扰RNA对骨肉瘤细胞ARHI基因、蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响以及ARHI基因对PI3K/Akt信号转导通路的影响 | 第83-102页 |
| 1.材料与方法 | 第84-90页 |
| ·实验材料和仪器 | 第84-86页 |
| ·药品和试剂 | 第84页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第84-85页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第85-86页 |
| ·实验方法 | 第86-90页 |
| ·si RNA转染ARHI稳定表达的MG-63 细胞 | 第86-87页 |
| ·RT-PCR检测ARHI si RNA转染后MG-63 细胞中ARHI m RNA的表达 | 第87-88页 |
| ·蛋白质印迹法检测ARHI si RNA转染后MG-63 细胞中ARHI蛋白的表达 | 第88页 |
| ·MTT实验检测ARHI si RNA转染后对MG-63 细胞增值的影响 | 第88页 |
| ·流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染色法检测ARHI si RNA转染后对MG-63 细胞凋亡的影响 | 第88-89页 |
| ·ARHI基因对骨肉瘤细胞PI3K/Akt信号转导通路的影响 | 第89-90页 |
| ·Caspase-Glo? 3/7 试验检测ARHI基因对MG-63 细胞中Caspase-3活性的影响 | 第90页 |
| ·统计学分析 | 第90页 |
| 2.结果 | 第90-95页 |
| ·ARHI si RNA成功转染至骨肉瘤MG-63 细胞 | 第90-92页 |
| ·ARHI si RNA转染后MG-63 细胞的增殖、凋亡变化 | 第92-94页 |
| ·MTT法检测细胞增殖变化 | 第92-93页 |
| ·ARHI si RNA转染后MG-63 细胞的凋亡率变化 | 第93-94页 |
| ·ARHI基因与PI3K/Akt信号转导通路的关系 | 第94-95页 |
| ·Caspase-3 活性检测 | 第95页 |
| 3.讨论 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-102页 |
| 全文总结 | 第102-104页 |
| 综述 骨肉瘤基因治疗研究进展 | 第104-114页 |
| 参考文献 | 第110-114页 |
| 英汉缩略语名词对照 | 第114-117页 |
| 在校期间科研成果 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
