| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第1章 研究背景 | 第15-34页 |
| ·概述 | 第15-16页 |
| ·TRAIL研究进展 | 第16-19页 |
| ·TRAIL的结构 | 第16页 |
| ·TRAIL与死亡受体 | 第16-18页 |
| ·TRAIL介导的肿瘤细胞凋亡作用 | 第18-19页 |
| ·Vasostatin研究进展 | 第19-21页 |
| ·肿瘤与血管新生 | 第19页 |
| ·血管生成抑制疗法与血管生成抑制因子 | 第19-20页 |
| ·Vasostatin的结构与功能 | 第20-21页 |
| ·细胞毒性-血管生成抑制联合抑瘤 | 第21-22页 |
| ·细胞毒性-血管生成抑制融合蛋白 | 第22-23页 |
| ·融合蛋白药物研究进展 | 第22页 |
| ·细胞毒性-血管生成抑制融合蛋白的构建 | 第22-23页 |
| ·融合蛋白连接臂研究 | 第23-27页 |
| ·连接臂的作用 | 第23-24页 |
| ·柔性连接臂 | 第24-25页 |
| ·刚性连接臂 | 第25页 |
| ·可裂解连接臂 | 第25-27页 |
| ·连接臂选择策略 | 第27页 |
| ·蛋白包涵体结构 | 第27-32页 |
| ·包涵体的形成与特征 | 第27-30页 |
| ·包涵体的类天然结构 | 第30页 |
| ·包涵体类天然结构与体外变复性 | 第30-31页 |
| ·包涵体活性 | 第31-32页 |
| ·本课题的研究背景、内容及意义 | 第32-34页 |
| ·本论文的研究背景和意义 | 第32页 |
| ·研究内容 | 第32-34页 |
| 第2章 VAS-TRAIL融合蛋白基因的克隆与表达 | 第34-55页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·材料与方法 | 第35-45页 |
| ·质粒、基因与菌株 | 第35页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第35-37页 |
| ·质粒小提试剂盒提取大肠杆菌质粒 | 第37-38页 |
| ·PCR产物回收 | 第38页 |
| ·胶回收DNA片段 | 第38页 |
| ·pET28a-TV及pET28a-VT表达载体的构建 | 第38-41页 |
| ·pET28a-SUMO-TV及pET28a-SUMO-VT表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·pMAL-c5x-TV及pMAL-c5x-VT表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白的重组表达 | 第44页 |
| ·融合蛋白MBP-TRAIL-VAS/MBP-VAS-TRAIL的纯化与酶切 | 第44-45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-53页 |
| ·pET28a-TV及pET28a-VT表达载体的构建 | 第45-47页 |
| ·融合蛋白TRAIL-VAS及VAS-TRAIL的表达 | 第47-48页 |
| ·pET28a-SUMO-TV及pET28a-SUMO-VT表达载体的构建 | 第48页 |
| ·融合蛋白SUMO-TRAIL-VAS及SUMO-VAS-TRAIL的表达 | 第48-49页 |
| ·pMAL-c5x-TV及pMAL-c5x-VT表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·融合蛋白MBP-TRAIL-VAS及MBP-VAS-TRAIL的表达 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白MBP-TRAIL-VAS及MBP-VAS-TRAIL的纯化与酶切 | 第51-53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 第3章 融合蛋白的体外变复性研究 | 第55-74页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·材料与方法 | 第55-61页 |
| ·细胞株 | 第55页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第55-56页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第56-57页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第57-58页 |
| ·包涵体的溶解 | 第58页 |
| ·稀释复性 | 第58-59页 |
| ·透析复性 | 第59-60页 |
| ·复性融合蛋白的纯化 | 第60-61页 |
| ·融合蛋白体外活性测定 | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-73页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第61-62页 |
| ·包涵体的溶解 | 第62-63页 |
| ·稀释复性 | 第63-67页 |
| ·透析复性 | 第67-68页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第68-70页 |
| ·融合蛋白体外活性测定 | 第70-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 第4章 基于包涵体构象及活性的融合蛋白连接臂选择策略 | 第74-84页 |
| ·引言 | 第74-75页 |
| ·材料与方法 | 第75-78页 |
| ·质粒、基因与菌株 | 第75页 |
| ·细胞株 | 第75页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第75页 |
| ·带有连接臂的VAS-TRAIL融合蛋白表达载体构建 | 第75-76页 |
| ·带有连接臂的VT融合蛋白的重组表达 | 第76页 |
| ·Western blotting鉴定 | 第76-77页 |
| ·融合蛋白包涵体的洗涤 | 第77页 |
| ·融合蛋白包涵体的蛋白浓度测定 | 第77页 |
| ·ATR-FTIR检测包涵体构象 | 第77页 |
| ·融合蛋白包涵体活性的测定 | 第77-78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-82页 |
| ·带有连接臂的VAS-TRAIL融合蛋白表达载体构建 | 第78页 |
| ·带有连接臂的VT融合蛋白的重组表达 | 第78-80页 |
| ·连接臂对融合蛋白包涵体构象的影响 | 第80-81页 |
| ·连接臂对融合蛋白包涵体活性的影响 | 第81-82页 |
| ·本章小结 | 第82-84页 |
| 第5章 三重促溶系统溶解和复性融合蛋白包涵体 | 第84-102页 |
| ·引言 | 第84页 |
| ·材料与方法 | 第84-89页 |
| ·细胞株 | 第85页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第85页 |
| ·融合蛋白表达和包涵体制备 | 第85页 |
| ·三重促溶系统溶解包涵体 | 第85-86页 |
| ·融合蛋白的荧光发射光谱检测 | 第86页 |
| ·三重促溶系统溶解融合蛋白包涵体的梯度透析复性 | 第86页 |
| ·VAS-TRAIL融合蛋白包涵体的溶解与复性 | 第86-87页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第87页 |
| ·融合蛋白圆二色谱检测 | 第87页 |
| ·融合蛋白体外活性测定 | 第87-88页 |
| ·融合蛋白的分子模拟 | 第88页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第88页 |
| ·融合蛋白分子排阻色谱分析 | 第88-89页 |
| ·结果与讨论 | 第89-100页 |
| ·三重促溶系统溶解包涵体 | 第89-90页 |
| ·融合蛋白的荧光发射光谱检测 | 第90-91页 |
| ·三重变性缓冲液溶解融合蛋白的梯度透析复性 | 第91-93页 |
| ·VAS-TRAIL融合蛋白的溶解与复性 | 第93-94页 |
| ·复性后融合蛋白的纯化 | 第94-95页 |
| ·融合蛋白圆二色谱检测 | 第95-96页 |
| ·融合蛋白体外活性测定 | 第96-97页 |
| ·融合蛋白的分子模拟 | 第97-98页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第98-99页 |
| ·融合蛋白分子排阻色谱分析 | 第99-100页 |
| ·本章小结 | 第100-102页 |
| 第6章 结论与展望 | 第102-105页 |
| ·结论 | 第102-103页 |
| ·创新点 | 第103页 |
| ·展望 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-116页 |
| 致谢 | 第116-118页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第118页 |
