| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| ·转基因技术的研究进展及其应用 | 第10-12页 |
| ·转基因动物的研究方法及研究进展 | 第12-15页 |
| ·传统的转基因研究方法 | 第12-13页 |
| ·新发展的高效转基因方法 | 第13-15页 |
| ·转基因生物安全研究进展 | 第15页 |
| ·phiC31整合酶系统 | 第15-18页 |
| ·phiC31整合酶系统的作用机理 | 第15-16页 |
| ·phiC31整合酶的应用 | 第16-18页 |
| ·Cre/Loxp重组酶系统 | 第18-19页 |
| ·Cre/Loxp重组酶系统的作用机理 | 第18-19页 |
| ·Cre/Loxp重组酶系统的应用 | 第19页 |
| ·本实验研究的目的意义 | 第19-20页 |
| 2 定点整合的无筛选标记LacS基因表达载体的构建 | 第20-31页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·实验仪器及设备 | 第20页 |
| ·实验耗材及试剂 | 第20页 |
| ·实验菌种及载体 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-26页 |
| ·引物设计 | 第21页 |
| ·相应DNA片段的扩增 | 第21-24页 |
| ·定点整合的无筛选标记LacS基因表达载体pEGFP-N1-LacS的构建 | 第24-26页 |
| ·实验结果 | 第26-30页 |
| ·相应DNA片段的扩增 | 第26-27页 |
| ·定点整合的无筛选标记LacS基因表达载体pEGFP-N1-LacS的构建 | 第27-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 3 phiC31整合酶mRNA的制备 | 第31-36页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·实验仪器及设备 | 第31页 |
| ·实验耗材及试剂 | 第31页 |
| ·实验菌种及载体 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-34页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·phiC31整合酶基因片段扩增 | 第32-33页 |
| ·带有T7启动子的phiC31整合酶基因片段与质粒pEGFP-N1的连接 | 第33页 |
| ·phiC31整合酶mRNA体外转录 | 第33-34页 |
| ·实验结果 | 第34-36页 |
| ·phiC31整合酶基因片段扩增 | 第34页 |
| ·带有T7启动子的phiC31整合酶基因片段与质粒pEGFP-N1的连接 | 第34-35页 |
| ·phiC31整合酶mRNA体外转录 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36页 |
| 4 奶牛成纤维细胞系建立 | 第36-40页 |
| ·实验材料及试剂 | 第36-37页 |
| ·实验仪器及耗材 | 第36页 |
| ·实验试剂 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·奶牛胎儿皮肤成纤维细胞的分离培养 | 第37页 |
| ·细胞生长曲线测定 | 第37-38页 |
| ·实验结果 | 第38-39页 |
| ·奶牛胎儿皮肤成纤维细胞的分离培养 | 第38页 |
| ·奶牛胎儿成纤维细胞生长曲线测定 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 5 利用phiC31整合酶mRNA建立转LacS基因奶牛细胞系 | 第40-45页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·实验仪器及耗材 | 第40页 |
| ·实验试剂 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·LacS基因的定点整合细胞转染 | 第40-41页 |
| ·6418筛选细胞 | 第41页 |
| ·转LacS基因的奶牛胎儿成纤维细胞的鉴定 | 第41-43页 |
| ·实验结果 | 第43-44页 |
| ·LacS基因的定点整合细胞转染 | 第43页 |
| ·G418筛选细胞 | 第43页 |
| ·转LacS基因的奶牛胎儿成纤维细胞的鉴定 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 6 利用Cre重组酶切除转LacS基因细胞中的标记基因 | 第45-48页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·实验仪器及设备 | 第45页 |
| ·实验耗材及试剂 | 第45页 |
| ·实验菌种及载体 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·Cre整合酶诱导表达与提取 | 第45页 |
| ·利用Cre穿膜肽切除转Lac8基因细胞标记基因 | 第45-46页 |
| ·无标记转Lac8基因细胞鉴定 | 第46-47页 |
| ·实验结果 | 第47-48页 |
| ·Cre整合酶诱导表达与提取 | 第47页 |
| ·无标记转LacS基因细胞鉴定 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48页 |
| 7 结论 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录 | 第57-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
