| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 绪论 | 第8-17页 |
| ·胚胎干细胞的研究 | 第8-9页 |
| ·胚胎十细胞 | 第8页 |
| ·ES细胞的研究进展 | 第8-9页 |
| ·现代动物转基因技术的研究概况 | 第9-11页 |
| ·转基因动物的研究技术手段及历程 | 第9-10页 |
| ·转基因兔的应用及进展 | 第10-11页 |
| ·OCT4多能性的研究概况 | 第11-13页 |
| ·DNA甲基化的研究概况 | 第13-15页 |
| ·本研究的课题设计 | 第15-17页 |
| ·OCT4的全能性 | 第15页 |
| ·建立DNA甲基化-CMV启动子甲基化技术平台 | 第15-17页 |
| 2 实验方法和步骤 | 第17-34页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·实验动物 | 第17页 |
| ·主要材料与试剂 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·培养液的配制 | 第18页 |
| ·实验操作方法 | 第18-24页 |
| ·PCR | 第18-19页 |
| ·琼脂糖核酸电泳 | 第19页 |
| ·胶回收纯化DNA | 第19-20页 |
| ·酶切 | 第20页 |
| ·连接 | 第20页 |
| ·转化 | 第20-21页 |
| ·重组子的抽提、筛选和鉴定 | 第21页 |
| ·ES细胞转染、挑克隆、传代、复苏细胞、冻存细胞的方法 | 第21-24页 |
| ·质粒的构建方法 | 第24-27页 |
| ·引物的设计 | 第24-25页 |
| ·CMVRFP-C1的设计和构建 | 第25-26页 |
| ·rOct4-RFP质粒得设计和构建 | 第26-27页 |
| ·表达载体的验证 | 第27-29页 |
| ·细胞转染和筛选建系 | 第27-28页 |
| ·诱导rOCT4-RFP转基因E14细胞体外分化 | 第28页 |
| ·rOCT4-RFP转染雄性兔体细胞 | 第28-29页 |
| ·转基因成纤维细胞PCR鉴定 | 第29页 |
| ·DNA甲基化-CMV启动子甲基化实验方法 | 第29-34页 |
| ·DNA甲基化检测——亚硫酸盐修饰后测序法 | 第29页 |
| ·成纤维细胞的培养及DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·亚硫酸修饰方法步骤 | 第30页 |
| ·修饰后DNA回收方法步骤 | 第30-31页 |
| ·甲基化的检测步骤 | 第31-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-43页 |
| ·质粒构建及鉴定 | 第34-35页 |
| ·CMV-RFP-C1质粒和rOct4-RFP质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·胚胎干细胞转染鉴定 | 第35-36页 |
| ·诱导rOCT4-RFP转基因E14细胞体外分化 | 第36-38页 |
| ·rOCT4-RFP转染兔成纤维细胞及鉴定 | 第38-39页 |
| ·甲基化检测结果 | 第39-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |