中文摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-11页 |
1 文献综述 | 第11-34页 |
·昆虫病毒研究进展 | 第11-23页 |
·昆虫病毒的分类 | 第11-22页 |
·昆虫病毒研究的意义 | 第22-23页 |
·正链RNA病毒基因组RNA复制机制研究进展 | 第23-27页 |
·病毒RdRP的结构特征简介 | 第23-24页 |
·病毒RNA复制起始机制简介 | 第24页 |
·病毒RdRP的末端转移酶活性简介 | 第24-25页 |
·野田村病毒复制机制简介 | 第25-27页 |
·昆虫抗病毒天然免疫研究进展 | 第27-34页 |
·昆虫RNAi通路简介 | 第28-31页 |
·昆虫Toll通路简介 | 第31-32页 |
·昆虫IMD通路简介 | 第32-34页 |
2 武汉野田村病毒复制起始机制及Prot A酶活性研究 | 第34-65页 |
·引言 | 第34-35页 |
·材料与方法 | 第35-41页 |
·质粒的构建 | 第35页 |
·重组蛋白的表达与纯化 | 第35-36页 |
·RdRP反应RNA模板的制备与纯化 | 第36-37页 |
·体外RdRP反应 | 第37页 |
·RT-PCR | 第37页 |
·S1核酸酶分析 | 第37-38页 |
·Northern blot分析 | 第38页 |
·体外TNTase反应 | 第38-39页 |
·解旋酶反应双链RNA底物的制备 | 第39页 |
·解旋酶反应 | 第39-41页 |
·结果 | 第41-59页 |
·体外表达的WhNV Prot A具有RdRP活性 | 第41-44页 |
·WhNV Prot A以从头合成机制起始RNA合成 | 第44-46页 |
·WhNV Prot A的生物化学性质 | 第46-49页 |
·NTP预孵育与RdRP抑制物对WhNV Prot A活性的影响 | 第49-50页 |
·WhNV Prot A具有末端转移酶功能 | 第50-52页 |
·Prot A的RdRP和末端转移酶活性与RNA 3’末端密切相关 | 第52-54页 |
·Prot A的末端转移酶功能可以修复3’末端缺失的RNA模板 | 第54-55页 |
·Prot A的RdRP和末端转移酶功能所需的顺式作用元件 | 第55-57页 |
·Prot A具有解旋活性 | 第57-58页 |
·Prot A的解旋活性需要NTP和二价金属离子 | 第58-59页 |
·讨论 | 第59-65页 |
3 昆虫RNA病毒诱发的天然免疫机制研究 | 第65-90页 |
·引言 | 第65-66页 |
·材料与方法 | 第66-72页 |
·果蝇培养与使用 | 第66页 |
·病毒与细菌 | 第66页 |
·表达质粒的构建 | 第66-67页 |
·dsRNA的构建 | 第67页 |
·细胞培养与转染 | 第67页 |
·Western blot分析 | 第67-68页 |
·Norern blot分析 | 第68页 |
·荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR) | 第68页 |
·免疫沉淀反应 | 第68-69页 |
·RNA免疫沉淀反应(RNA-IP) | 第69页 |
·poly-A长度测量实验(Poly-A test,PAT) | 第69-72页 |
·结果 | 第72-87页 |
·Dcr-2与AGO2对FHV基因组RNA的影响 | 第72页 |
·FHV和VSV可以激发Toll通路免疫反应 | 第72-73页 |
·在果蝇S2细胞中Dcr-2参与Toll通路免疫反应 | 第73-76页 |
·在成年果蝇中Dcr-2参与Toll通路免疫反应 | 第76-78页 |
·Dcr-2可以调控Toll的蛋白水平 | 第78-80页 |
·Dcr-2可以与Toll mRNA的3'-UTR结合 | 第80-84页 |
·Dcr-2可以影响Toll mRNA的poly-A尾长度 | 第84-85页 |
·Toll通路不能抑制FHV的复制 | 第85-87页 |
·讨论 | 第87-90页 |
研究总结 | 第90-92页 |
参考文献 | 第92-104页 |
博士在读期间发表或待发表的论文 | 第104-106页 |
致谢 | 第106页 |