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昆虫RNA病毒复制及昆虫抗病毒天然免疫机制研究

中文摘要第1-7页
Abstract第7-11页
1 文献综述第11-34页
   ·昆虫病毒研究进展第11-23页
     ·昆虫病毒的分类第11-22页
     ·昆虫病毒研究的意义第22-23页
   ·正链RNA病毒基因组RNA复制机制研究进展第23-27页
     ·病毒RdRP的结构特征简介第23-24页
     ·病毒RNA复制起始机制简介第24页
     ·病毒RdRP的末端转移酶活性简介第24-25页
     ·野田村病毒复制机制简介第25-27页
   ·昆虫抗病毒天然免疫研究进展第27-34页
     ·昆虫RNAi通路简介第28-31页
     ·昆虫Toll通路简介第31-32页
     ·昆虫IMD通路简介第32-34页
2 武汉野田村病毒复制起始机制及Prot A酶活性研究第34-65页
   ·引言第34-35页
   ·材料与方法第35-41页
     ·质粒的构建第35页
     ·重组蛋白的表达与纯化第35-36页
     ·RdRP反应RNA模板的制备与纯化第36-37页
     ·体外RdRP反应第37页
     ·RT-PCR第37页
     ·S1核酸酶分析第37-38页
     ·Northern blot分析第38页
     ·体外TNTase反应第38-39页
     ·解旋酶反应双链RNA底物的制备第39页
     ·解旋酶反应第39-41页
   ·结果第41-59页
     ·体外表达的WhNV Prot A具有RdRP活性第41-44页
     ·WhNV Prot A以从头合成机制起始RNA合成第44-46页
     ·WhNV Prot A的生物化学性质第46-49页
     ·NTP预孵育与RdRP抑制物对WhNV Prot A活性的影响第49-50页
     ·WhNV Prot A具有末端转移酶功能第50-52页
     ·Prot A的RdRP和末端转移酶活性与RNA 3’末端密切相关第52-54页
     ·Prot A的末端转移酶功能可以修复3’末端缺失的RNA模板第54-55页
     ·Prot A的RdRP和末端转移酶功能所需的顺式作用元件第55-57页
     ·Prot A具有解旋活性第57-58页
     ·Prot A的解旋活性需要NTP和二价金属离子第58-59页
   ·讨论第59-65页
3 昆虫RNA病毒诱发的天然免疫机制研究第65-90页
   ·引言第65-66页
   ·材料与方法第66-72页
     ·果蝇培养与使用第66页
     ·病毒与细菌第66页
     ·表达质粒的构建第66-67页
     ·dsRNA的构建第67页
     ·细胞培养与转染第67页
     ·Western blot分析第67-68页
     ·Norern blot分析第68页
     ·荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)第68页
     ·免疫沉淀反应第68-69页
     ·RNA免疫沉淀反应(RNA-IP)第69页
     ·poly-A长度测量实验(Poly-A test,PAT)第69-72页
   ·结果第72-87页
     ·Dcr-2与AGO2对FHV基因组RNA的影响第72页
     ·FHV和VSV可以激发Toll通路免疫反应第72-73页
     ·在果蝇S2细胞中Dcr-2参与Toll通路免疫反应第73-76页
     ·在成年果蝇中Dcr-2参与Toll通路免疫反应第76-78页
     ·Dcr-2可以调控Toll的蛋白水平第78-80页
     ·Dcr-2可以与Toll mRNA的3'-UTR结合第80-84页
     ·Dcr-2可以影响Toll mRNA的poly-A尾长度第84-85页
     ·Toll通路不能抑制FHV的复制第85-87页
   ·讨论第87-90页
研究总结第90-92页
参考文献第92-104页
博士在读期间发表或待发表的论文第104-106页
致谢第106页

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